吉氏染色:原理、步骤、结果

吉姆萨染色剂是一种罗曼诺夫斯基染色剂，以德国化学家古斯塔夫·吉姆萨命名，他发明了一种染料溶液。它主要是为在血液涂片中显示疟原虫而设计的，但它也用于组织学中对血液涂片进行常规检查。

吉姆萨染色原理

吉姆萨染色是一种差示染色，含有天蓝色、亚甲基蓝和伊红染料的混合物。它对DNA的磷酸基有特异性，并附着在有大量腺嘌呤-胸腺嘧啶结合的地方。

蔚蓝色和伊红是酸性染料，可以不同程度地染色细胞的基本成分，如细胞质、颗粒等。

亚甲基蓝是碱性染料，可以染色酸性成分，尤其是细胞核。

甲醇可以作为固定剂和细胞染色剂。固定剂不允许细胞发生进一步的变化，使它们粘附在玻片上。

吉姆萨染色剂的制备

吉姆沙染色剂是疟疾诊断中最常用的血膜染色剂。它在商业上是一种现成的产品，但质量因来源而异。通过遵循简单的规则，实验室可以使用吉姆萨染色粉制备吉姆萨染色原液，从而确保使用一致的高质量染色剂。

作文

吉姆萨染色剂的基本成分相同;然而，稀释可以根据他们的用途。

成分	通用汽车/ L
染色粉	7.6
甘油	500毫升
甲醇	500毫升

供应品、材料和设备

1. 吉姆沙粉或染色剂，7.6 g(最好是生物染色委员会级别，以确保非常好的产品的标准质量;
2. 纯甲醇，高档，无丙酮，500ml;
3. 高纯度甘油，500ml;
4. 甲醇清洗过的固体玻璃珠，直径3-5毫米，50-100片;
5. 抹刀:抹刀或量勺;
6. 称量纸;
7. 刻度圆柱;
8. 漏斗:玻璃或塑料漏斗;
9. 一个螺旋盖，深色或琥珀色玻璃瓶，清洁干燥，容量500毫升(如没有，可用化学清洁，干燥，透明的硬玻璃瓶或合适尺寸的聚乙烯瓶，但应用深色纸包裹);
10. 重量可达0.01克的分析天平;而且
11. 如果有搅拌器的话。

注意:

• 制备吉姆沙染色剂的人应遵循普遍的预防措施，包括使用相关的个人防护装备比如手套、安全眼镜和实验服。
• 避免接触和吸入甲醇和吉姆萨染色剂。甲醇和吉姆萨染色剂是易燃的，吸入或吞食有剧毒。不用的时候，把这两种化学药品都放在上锁的柜子里。

吉姆沙原液的制备

吉姆萨染色工作液

吉姆萨染色的工作液应由吉姆萨原液新鲜配制而成。根据对疟疾血膜进行染色的染色方法，吉姆萨工作溶液为10%(快速法)或3%(慢速法)。

快速方法用于门诊诊所和繁忙的实验室，在这些地方快速诊断对患者管理至关重要，而缓慢方法用于对流行病学或现场收集的大量玻片进行染色。

快速(10%工作溶液)法

1. 一次染色1-15张玻片的最常用方法。
2. 用于门诊诊所和繁忙的实验室
3. 有效的方法，但昂贵(因为消耗更多的污渍)

慢速(3%工作溶液)法

1. 用于染色大量玻片(>20)
2. 适用于在横断面或流行病学调查，实地调查中收集的血液膜染色，或为教学准备批量幻灯片
3. 耗时的方法，所以在需要快速结果时不太合适
4. 与快速方法相比更便宜，因为它需要更少的染色。

物料及供应

• 吉姆萨染色，从原液中转移并过滤到25或50毫升的瓶子中;
• 缓冲水，pH 7.2;
• 烧杯或试管，清洁，容量5-10毫升;
• 一个巴斯德移液器
• Whatman滤纸，1级。

吉姆萨工作液的制备

根据您的需要准备10%或3%的吉姆萨工作溶液。每块带血膜的切片大约需要3ml的染色液。

1. 将90毫升准备好的缓冲水(pH值7.2)放入干净的烧杯或试管中。
2. 用Whatman #1纸过滤吉姆萨原液，并将其转移到25 - 50毫升的容器中。
3. 用干净干燥的移液管加入10毫升吉姆沙原液。请勿从盛有吉姆沙原液的大瓶中取出，以免污染原液。
4. 在染色血膜之前准备吉姆沙工作液，并在准备后15分钟内使用。丢弃任何未使用的污渍。

要制备3%的吉姆萨工作溶液，请遵循上述步骤，但将97 mL缓冲水与3 mL吉姆萨原液混合。

玻片染色

薄血涂片年代

1. 将风干的薄膜在含绝对甲醇的柯普林瓶中短暂浸渍(两次浸渍)，以固定在绝对甲醇中。
2. 取出，晾干。
3. 用吉姆萨染色液染色
4. 通过在一个装有缓冲水的科普林罐子里简单地浸泡滑片(一到两次)。
   注意:过度洗涤会使薄膜脱色。
5. 让空气在垂直位置干燥。先在40倍显微镜下观察，然后用油浸镜观察

为厚血涂片

1. 让薄膜完全风干几个小时或一夜。不要在培养箱或加热中干燥薄膜，因为这将固定血液并干扰红细胞的溶解。
   注意:如果需要快速诊断疟疾，可以制作比平常稍薄的厚膜，晾干1小时，然后染色。
2. 不修理。
3. 用稀释的吉氏染色剂染色
4. 将薄膜放入缓冲水中冲洗3至5分钟。
5. 垂直晾干，在40倍显微镜下观察，然后使用油浸镜头。

为沙眼衣原体

按照上述步骤，用1:40稀释的染色液(在19.5 ml缓冲水中加入0.5 ml金沙原液)，将染色液静置90-120分钟。

观察

在显微镜下观察，细胞器、细菌和寄生虫是根据它们的形态和颜色来区分的;

电池组件	染色后观察到的颜色
红细胞	Mauve-pink
中性粒细胞	细胞核红紫色，细胞质粉红色
嗜酸性粒细胞	细胞核呈紫色，细胞质淡红色，颗粒呈红色至橙色。
嗜碱粒细胞	紫色核，蓝色粗粒。
淋巴细胞	深蓝色细胞核，浅蓝色细胞质。
单核细胞	粉红色的细胞质和紫色的细胞核。
血小板	紫色至紫色颗粒。
宿主细胞核	深紫色
白细胞的核	深紫色
宿主细胞的细胞质	淡蓝色
白细胞的细胞质	浅蓝色或灰蓝色
黑色素颗粒	黑绿
细菌	浅或深蓝色
沙眼衣原体包涵体	蓝紫色到深紫色取决于发展阶段
包柔氏螺旋体螺旋体	还有
Yersinina耶coccobacilli	蓝色，末端有深色染色(双极染色)
疟疾寄生虫	疟疾寄生虫有红色或粉红色的细胞核和蓝色的细胞质。 如果间日疟原虫如图所示，Schüffner点是红细胞细胞质中粉红色点的均匀地毯． 如果恶性疟原虫毛雷尔裂口在红细胞细胞质中可见分布不均匀的粗体。

吉姆萨染色剂的使用

赖特-吉姆萨染色常用于显示外周血和骨髓涂片中的细胞成分。吉姆萨染色法用于获得不同白细胞计数。它也被用来区分核和细胞质形态的各种血细胞，如血小板，红细胞，和白细胞。

在微生物学中，吉姆萨染色法用于包体的染色沙眼衣原体，包柔氏螺旋体如果没有韦森染色剂，则进行染色鼠疫杆菌．吉姆萨染色剂也用于染色荚膜组织胞浆菌，耶氏肺孢子菌，肉芽克雷伯菌，马尔内菲Talaromyces marneffei(以前称为青霉菌marneffei)，以及偶尔细菌的胶囊。

细胞遗传学也使用这种染色染色染色体和鉴定染色体畸变。通常用于g带(giemsa -band)

寄生虫学

在微生物学中，此染色剂最常用于寄生虫学，以检测红细胞内(疟原虫,babesiae)和外红细胞(锥虫，微丝虫)寄生虫。它也被用于细胞内无芒子的检测利什曼虫物种或鲁兹锥体。

赖特-吉姆萨染色的外周血涂片显微照片，说明几个阶段疟原虫物种。

吉氏染色也用于弓形虫病的实验室诊断。个的刚地弓形虫最好见于针吸或赖特-吉姆萨染色的印痕涂片。吉氏涂片特征为弓形或新月形速殖子，中心核染色深。

wright - giemsa印迹涂片显示少量背景巨噬细胞和大量微小的2 - 3个无散体利什曼虫．这些形式通常难以与酵母细胞区分荚膜组织胞浆菌．然而，仔细观察就会发现，这些形式中的许多都有一个小的、杆状的着丝体的特征利什曼虫无鞭毛体。

细菌学

Wright-Giemsa染色对细菌的染色作用不大，但可用于各种专性细胞内寄生虫的实验室诊断。

诊断沙眼衣原体如果用Giemsa法或Gimenez法染色的样品中发现大量衣原体包涵体，则可能导致感染。

腹股沟肉芽肿的实验室诊断依赖于单个核细胞内细菌的染色和观察组织涂片或活检标本的“多诺万体”，用Giemsa和Wright染色检查。

黑死病患者外周血涂片的Wright-Giemsa染色显示了典型的双相染色特征鼠疫的。注:双极染色“封闭安全销”型细胞。

在患有腐肉病的人身上巴尔通氏体属bacilliformis可见于细胞内和细胞外组织。在吉氏染色的血膜上，可见蓝至紫色的红细胞外、红细胞内杆菌和球孢杆菌。

真菌学

检测细胞内酵母菌的形态荚膜组织胞浆菌。

病毒学

染色也有助于显示特定的细胞内病毒夹杂物。单纯疱疹病毒产生核内包体的多核巨细胞，用Wright染色法(或Wright- giemsa染色法)染色后可见。