浇板法通常是计算菌落形成细菌的数量在液体标本的选择方法。由于样品与熔融琼脂介质混合，因此可以使用更大的体积扩散板．
目录
原则
在倒板法中，用无菌移液管将固定量的接种物(一般为1毫升)从肉汤/样品中放置在无菌培养皿的中心。熔融冷却琼脂(约。然后将15mL)倒入含有接种物的培养皿中，并充分混合。琼脂凝固后，将平板倒置，37℃孵育24-48小时。
微生物会在介质表面和内部生长。在培养基中生长的菌落一般都很小，可能会汇合;少数生长在琼脂表面的细菌大小相同，看起来像条纹板上的细菌。仔细计算每个(大的和小的)菌落(如果需要，使用放大菌落计数器)。每个菌落代表一个“菌落形成单位”(CFU)。
特定测试样品中存在的微生物数量由以下公式确定:
CFU/mL= CFU *稀释因子* 1/等
为了精确计数，最佳计数应在30-300菌落/板。为保证印版数不清，印版须一系列稀释。浇板计数法比常规计数法更精确条纹板法．平均而言，它会给出较低的计数，因为热敏微生物可能会在接触热的熔融琼脂介质时死亡。
使用浇板法
倒板技术可以确定样品中每毫升微生物的数量。它的优点是不需要事先准备好的盘子，经常被用于检测食品的细菌污染。
材料及设备
- 检测样本
- 平板计数琼脂(PCA)或营养琼脂
- 热水浴45°C
- 无菌培养皿
- 火焰
- 带有放大镜的菌落计数器
- 16*150毫米无菌试管
- 各种规格的移液管(例如01、1.0和2.0 mL)
浇板工艺流程
- 准备稀释的测试样品，预计含有30-300 CFU/mL。(遵循连续稀释法)
- 用指定mL(0.1或1.0 mL)的稀释标本接种标记的空培养皿
注:对于有关的详细说明移液管的使用，样品接种，稀释技术，等等，参考文献1。
倒入熔融琼脂孵育
- 收集一瓶无菌的熔融琼脂(含15ml已熔化的平板计数琼脂或任何其他标准培养基)从水浴(45°C)。
- 右手拿着瓶子;用左手的小指取下盖子。
- 点燃瓶口。
- 左手轻轻掀开培养皿盖子，将无菌熔融琼脂倒入培养皿中，盖上盖子。
- 点燃瓶口，重新盖上瓶盖。
- 在工作台上轻轻旋转盘子，使培养液和培养基充分混合．确保培养基均匀覆盖培养皿，不要将琼脂滑过培养皿边缘。
- 让琼脂完全凝胶化，不要干扰它。大约需要10分钟。
- 37°C倒置密封孵育24-48小时。
结果
24-48小时后，计数所有菌落(请注意，嵌入的殖民地将比表面的殖民地小得多)．一个放大菌落计数器可以帮助计数小的嵌入殖民地。
计算CFU/mL公式:=(菌落数量x稀释因子)/培养液体积*
假设10^4稀释的培养皿中有32个菌落。那么，在1ml原始样品中菌落形成单位的总数是(32)x (10)4) x1*= 3.2 × 105
*我们使用了1ml的样品在这个倒板技术。
浇板法的缺点
- 与条纹板/和或铺板技术相比，浇板方法的制备耗时较长。
- 与热琼脂接触的热敏生物丧失生存能力。被计数的生物体必须能够承受熔化琼脂温度的短暂暴露(~ 45°C至50°C)。
- 嵌入的菌落比碰巧在表面的菌落要小得多。因此，人们必须仔细地计算这些数字，以免漏掉任何一个。
- 在琼脂深处专性需氧菌的生长速率降低。
参考文献和进一步阅读
- 通用微生物学会(SGM)《基本实用微生物学手册》
