自动细胞计数器:原理，类型和应用-微生物在线

细胞计数是一种标准的实验室方法，用于计数或定量细胞在许多生命科学或医学诊断程序中使用。用设备计数细胞的方法有很多种，但大致分为手动计数和自动计数。手动电池计数器已经使用了几十年。尽管如此，它的计数错误和耗时的限制导致了更先进的仪器的自动细胞计数功能被称为自动单元格计数器．

自动单元计数器是实验室设备它会自动计算单元格。这些细胞可能来自人类、动物、植物、细菌、病毒和其他来源。该仪器可以提供更全面的浓度范围的准确细胞计数(即，细胞浓度低至5 x 10⁴/ml，高达1 x 10⁷/毫升)。

自动单元格计数器原理

在市场上，有不同类型的自动小区计数器。这个仪器的工作原理有两个不同的原理。这些包括;电阻抗法或光学方法．

电阻抗单元计数原理

它也被称为coulter原理。在这种情况下，每当电池通过两个电极之间的缝隙时，电阻或阻抗就会增加。孔径的大小与电池的大小相同。

这种阻抗变化与电池体积成正比。因此，它有助于计算样本体积中的细胞数量。

光学单元计数原理

它也被称为光散射单元计数原理。当一束光穿过一束稀释的细胞时，它会因为细胞而发生偏转。偏转光的强度和散射角取决于电池类型。结果，偏转是由光度计检测，它给出了在给定的样品体积中存在的细胞数量。

在光散射计数原理中，采用了鞘状流，其中细胞是流体力学定向的。鞘流的应用有助于提高检测效率。

自动单元格计数器的类型

基于上述原理，自动单元计数器有三种类型;

库尔特计数器

这些是基于电阻抗单元计数原理的粒子计数器。
它提供了样品中每个颗粒的细胞数量和大小。
他们无法提供细胞活力信息。
它在颗粒表征、血液学和计数细胞如脂肪细胞、植物细胞聚集物、细菌等方面有应用。

流式细胞分析仪

流式细胞仪测量单个细胞或颗粒的特性，在流中，光一次聚焦在一个细胞上。因此，不同波长的散射光和荧光信号被记录下来。
它被用来分析细胞的形状，它们的内部和外部结构，也确定蛋白质的数量。

基于图像的单元格计数器

它利用一个亮场或荧光显微镜与数码相机相结合，然后用图像分析软件进行分析。
基于亮场的细胞计数器使用比色染料进行细胞活力分析，而基于荧光的细胞计数器使用荧光染料。

自动单元计数器的操作程序

自动细胞计数仪器的工作方式不同。所以，我们强烈建议大家去看一下商用仪器附带的用户手册。

用于细胞计数的样品分别用台盼蓝染色或不用台盼蓝染色制备。

当不使用台盼蓝时，直接移液10µl样品。
当使用台盼蓝时，将10µl样品与10µl台盼混合，从混合物中抽取10µl移液管进行进一步分析。

自动计数单元的一般操作程序如下:

按电源开关打开仪器。
使用边缘处理计数载玻片，避免接触载玻片的光学表面。
将10 μl细胞悬浮液移液至计数载玻片任一腔室的外开口。
将计数载玻片插入载玻片槽。单元格计数器将自动启动单元格计数。
计数结果显示在当前计数屏幕上，作为每毫升的总细胞计数。假设细胞数高于或低于指定的范围。屏幕上显示值超出范围。从Current Count屏幕中选择View Image键来查看图像。
稀释计算器计算所需的体积调整，以达到实验所需的细胞浓度。
一旦仪器完成细胞计数，取出载玻片。
最后，使用后关掉仪器。

自动小区计数器的应用

自动细胞计数器在从研究到诊断等各个领域都有广泛的应用。自动小区计数器的应用如下:

它用于确定细胞计数，以检查用于研究目的的细胞培养系的活力。
自动细胞计数器用于血液分析。测定各种类型血细胞的浓度有助于确定个人的健康状况。
它也适用于尿液分析，以确定尿样中的细胞数量和类型。
自动细胞计数器用于测量细胞活力，即测量活细胞和死亡细胞的比例。
在细胞治疗中，它被用来控制给病人的细胞剂量。
研究微生物的生长速度需要细胞计数。

自动小区计数器的优点

自动化细胞计数器是实验室选择自动化的一个很好的替代品。它有以下优点:

它能在短时间内提供准确可靠的结果。
它显著降低了劳动力需求和细胞计数方差。
与人工计数方法相比，效率更高，成本更低。
与手工方法不同，它不需要在低细胞浓度下进行多次复制计数。

自动单元格计数器的局限性

虽然自动化单元计数器具有很大的优势，但它也有一些局限性，具体如下:

结果可能因干扰因素而有所不同。
价格昂贵，运行成本高。
在检测非典型细胞如毒性未成熟中性粒细胞时效率较低。
检测血小板团块作为一个单细胞和错误分类为白细胞或红细胞。

预防措施

以下是使用自动小区计数器时应采取的一些预防措施:

确保细胞悬浮液通过移液/涡流适当混合。不这样做可能导致不准确的结果。
按照安全规定将滑梯作为有害生物废物处理。
不要填满房间。仪器内的样品溢出可能导致细胞计数器的生物污染。

参考文献

Green R, Wachsmann-Hogiu S(2015)。自动化单元计数器的发展、历史和未来。临床检验杂志35(1):1-10。doi: 10.1016 / j.cll.2014.11.003。
Crocker J和Burnett D(2005)。实验室诊断科学。第二版。约翰威利父子有限公司

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