直接荧光抗体(DFA)试验

直接荧光抗体(DFA)测试是一种使用荧光标记检测特定抗原(通常是病毒、细菌或其他微生物表面的特定蛋白质)存在的快速显微程序单克隆抗体(mAb)．DFA技术是一种有价值的工具，可用于可视化难以从患者样本中分离或培养的某些细菌和病毒。

原则

荧光化学物质(如异硫氰酸荧光素)被偶联(附着)到的常数区域抗体．当标记的抗体与测试样本孵育时，如果存在抗原，抗体将与抗原结合。未结合的抗体被冲走。抗原存在的区域，用荧光显微镜可见为荧光苹果绿。如果特异性抗原缺失，就没有荧光。

过程

1. 将样品固定在玻片上制备样品。
2. 涂抹适量特定荧光标记抗体覆盖固定涂片。涂片在染色过程中不能干燥。
3. 36°±2°C在加湿室中孵育25 - 65分钟
4. 用适当的缓冲液(如磷酸盐缓冲盐水)或去离子水漂洗去涂片上多余的抗体。
5. 在暗室中使用紫外线显微镜，以100倍至200倍的放大率观察染色的涂片。

结果

• 阳性:特异性苹果绿荧光
• 阴性:无或很少有非特异性背景荧光

采用直接荧光抗体(DFA)试验

1. 的识别嗜肺性军团菌以及从环境或患者样本中分离出来的其他军团菌。
2. 宫颈内标本衣原体基本体的检测
3. 检测呼吸道合胞病毒(RSV)鼻咽吸出物中的抗原
4. 狂犬病毒抗原检测在怀疑有狂犬病感染的动物的大脑里

优势

1. 允许对标本的充分性进行视觉评估
2. 可用于不易培养的微生物(例如，在动物大脑中检测狂犬病毒抗原)
3. 具有敏感性和特异性(需要单克隆抗体)
4. 能标记单个细胞，并能在自然环境中查看细胞
5. 可以使用不同类型的荧光标记抗体，每种抗体都有不同的染料，在一个样本中观察多种细胞类型。

缺点

1. 昂贵的:许多人认为对a的要求荧光显微镜作为昂贵的奢侈品。
2. 荧光随着时间的推移会迅速消退，这使得幻灯片的存档变得困难。
3. 通常很难开发出工作良好的单克隆抗体，交叉反应可能是一个问题。

参考资料及进一步阅读

• 疾病预防控制中心:直接荧光抗体试验
• Madigan Michael T, Bender, Kelly S, Buckley, Daniel H, Sattley, W. Matthew， & Stahl, David A.(2018)。布罗克微生物生物学“，(第15版)。皮尔森。
• 诊断细菌学中的荧光抗体技术
• 美国农业部兽医生物制品中心:检测方案-检测病毒抗原的荧光抗体染色程序