诱导克林霉素耐药葡萄球菌和链球菌可检测圆盘扩散法采用克林霉素和红霉素圆盘或肉汤微量稀释的方法。这篇文章描述了d区测试。
CLSI建议对所有葡萄球菌进行诱导性克林霉素耐药检测，链球菌引起的肺炎，以及在报告克林霉素结果前对红霉素耐药和克林霉素敏感或中间的乙型溶血性链球菌。
原则
d区试验采用纸片扩散法进行，将15 μg红霉素圆盘靠近2 μg克林霉素圆盘放置在已接种葡萄球菌或链球菌分离物的琼脂板上;然后将培养皿孵育一夜。
靠近红霉素盘的克林霉素盘周围的抑制区变平(产生一个像字母D一样的抑制区)被认为是阳性结果，表明红霉素已诱导克林霉素耐药(阳性“D区试验”)。
对于红霉素耐药菌株，诱导试验可帮助实验室确定克林霉素结果应报告为敏感(诱导试验为阴性)还是耐药(诱导试验为阳性)。
红霉素和克林霉素的作用机制及耐药性的发生
红霉素(一种大环内酯)和克林霉素(一种林可沙胺)是两种不同的抗菌剂，它们通过与细菌细胞的50S核糖体亚单位结合来抑制蛋白质合成。在葡萄球菌中，对这两种抗菌药物的耐药性可通过核糖体靶位点的甲基化发生。这种抵抗通常是由嗯基因。
诱导克林霉素耐药的临床意义
大环内酯-林科氨酰胺-链霉素B (MLSB)耐药是通过靶侧修饰机制介导的，可导致对红霉素、克林霉素和链霉素B的耐药
- 本构如果在体外试验中进行，rRNA甲基化酶总是在这里产生金黄色葡萄球菌隔离对红霉素和克林霉素有抗性。
- 或者可以是诱导甲基化酶仅在诱导剂存在的情况下产生
（注意:红霉素是大环内酯-林科酰胺-链霉素B (MLSB)耐药的有效诱导剂。诱导耐药的分离株对红霉素耐药，但在常规体外试验中对克林霉素敏感)。
D检验的临床意义
克林霉素是一种有吸引力的经验性疑似治疗药物金黄色葡萄球菌因其优异的药代动力学和药效学特性而感染。临床失败的克林霉素治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染已被记录为克林霉素敏感但红霉素耐药的菌株。失败的原因是对克林霉素的诱导耐药。
在体内，克林霉素治疗可能选择本构erm突变体，这可能导致临床失败。克林霉素耐药可能是本构性或诱导性的。常规抗生素敏感性试验无法识别这些菌株。诱导克林霉素耐药试验采用D法检测诱导克林霉素耐药。
d区测试步骤
- 准备0.5麦克法兰标准红霉素耐药悬浮液金黄色葡萄球菌使用直接菌落悬浮或对数相接种制备方法分离。
- 在琼脂培养皿中培养细菌，静置3 - 15分钟。
- 缪氏琼脂(MHA)对葡萄球菌
- MHA加5%羊血或TSA加5%羊血治疗链球菌
- 将克林霉素(2-μg)和红霉素(15-μg)碟相距约15mm(边沿测量)。用于乙型溶血性链球菌和肺炎链球菌时，硬盘间距为12mm。
- 将培养皿翻转，在35°C下孵育16 - 18小时。
- 在35°C的环境空气培养箱中培养葡萄球菌16 - 18小时。
- 培养乙型溶血性链球菌和肺炎链球菌在35°C的5% CO2培养箱中培养20至24小时。
解释和报告
- 诱导克林霉素耐药=红霉素盘附近抑制区变平(d区)
- 无可诱导的克林霉素耐药=克林霉素盘周围有完全圆形的抑制区
- 即使没有明显的d区，在克林霉素盘周围的抑制区内的模糊生长表明克林霉素耐药。
诱导型克林霉素耐药菌株应报告为克林霉素耐药，并在报告中说明诱导型克林霉素耐药是体外试验结果，克林霉素对某些患者仍可能有效。
限制
- 尽管可诱导性克林霉素耐药结果为阳性，但克林霉素对某些患者仍可能有效。
- d区试验仅用于检测诱发克林霉素耐药葡萄球菌spp。S.pneumoniae，以及乙型溶血性链球菌。
- 为了确保可靠的结果，需要严格遵守规程，因为接种量、生长速度、培养基的pH值和配方、培养条件和持续时间、培养皿含量等许多因素都会影响结果。
