一旦微生物被分离出来并在纯培养物中生长，就有必要通过保持纯培养物不受污染来保持微生物的活力和纯度。类似地，微生物实验室必须保持从ATCC或商业供应商获得的质量控制(QC)库存。培养基、试剂盒和试剂的检测需要QC菌株。
通常在实验室中，将纯培养物定期转移到新鲜培养基上(传代培养)，以使微生物持续生长和存活。转移过程总是在无菌条件下进行，以避免污染。
由于反复传代费时，很难长期成功地保持大量的纯培养。此外，还有基因变化和污染的风险。因此，它现在正在被一些不需要频繁传代的现代方法所取代。这些方法包括冷藏、石蜡法、冷冻保存和冻干(冷冻干燥)。
短期存储
定期转移到新鲜媒体
菌株可以通过定期从以前的储备中准备新鲜的培养来保持。培养基、储存温度和转移的时间间隔因物种而异，必须事先确定。所选择的温度和介质应支持缓慢而不是快速的生长速度，以便传输之间的时间间隔可以尽可能长。许多更常见的异养菌在类似培养基上仍能存活数周或数月营养琼脂．
传递法的缺点是不能防止由于变异体和突变体的发展而引起的菌株特性的变化。
制冷
纯培养物可以成功地在0-4°C的冰箱或冷藏室中保存。这种方法适用的时间较短(细菌2-3周，真菌3-4个月)，因为微生物的代谢活动显著减缓但没有停止。因此，它们的生长继续缓慢，养分被利用，废物被释放到培养基中。这最终导致微生物在一段时间后死亡。
模具可以储存在上面马铃薯葡萄糖琼脂在4°C下倾斜6个月至1年。
保存在甘油在-20°C
- 在适当的固体培养基上培养纯净的培养基。
- 培养物完全培养后，用圈刮掉。
- 将小块培养物悬浮在无菌中性甘油中。
- 以1-2毫升的数量分布在螺旋盖管或小瓶中。
- 储存在-20°C。避免反复冻融。12-18个月后转学。
刺的文化
刺的文化在室温下仅用于非挑剔的生物，如葡萄球菌和肠杆菌科
- 用无碳水化合物琼脂准备试管。推荐使用Tryptic大豆琼脂。
- 把生物体插入琼脂中。
- 在35°C下孵育过夜。
- 用螺旋盖或软木塞关闭管子。将瓶盖或软木塞浸入熔融的石蜡中密封。
- 在室温下储存。一年后调任。
胱氨酸胰蛋白酶琼脂刺培养(CTA)建议使用此方法保存奈瑟氏菌属和链球菌。
- 准备半胱氨酸胰蛋白酶琼脂。
- 把生物体插入介质中。
- 在35°C下孵育过夜。
- 用螺旋盖或软木塞关闭管子。将瓶盖或软木塞浸入熔融的石蜡中密封。
- 对于奈瑟菌，保存在35°C，每两周转移一次。对于链球菌，在室温下储存，每月转移一次。
熟肉中等(厌氧菌）
熟肉培养基用于厌氧细菌的保存。
- 接种管熟肉中料用隔离剂。
- 在35°C下孵育过夜。
- 用螺旋盖或软木塞关闭管子。
- 在室温下储存。每两个月转一次班。
与不挑剔的细菌相比，挑剔细菌的保存是复杂的。找到这篇博文介绍了短期储存挑剔细菌的过程。
长期储存
长期保存方法允许传代培养间隔数月甚至数年。如果将分离株保持在-70°C或以下的冷冻状态，则可以无限期保存;这些温度可以在“超低冰柜”(-70°C)或液氮冰柜(-196°C)中实现。
冻干或保存在-70℃或以下是细菌培养物长期保存的最佳方法，不建议将分离物一般保存在-20℃。
在零下70摄氏度结冰
需氧菌和厌氧菌的长期储存可通过-70°C冷冻来实现。冷冻的，不挑剔的生物应每五年解冻，重新隔离和重新冷冻;挑剔的生物应每三年解冻、重新隔离和重新冷冻一次。抗酸杆菌(AFB)也可在-70°C与甘油的7H9肉汤中冷冻。病毒可在含有低温保护剂(如10%二甲基亚砜(DMSO)或胎牛血清)的溶液中在-70°C下无限期储存。
低温贮藏
低温保存(即在-196°C的液氮中冷冻或在-150°C的液氮上方的气相中冷冻)有助于纯培养物的长期保存。
在这种方法中，培养的微生物在-196°C的液氮中快速冷冻，在甘油或二甲基亚砜(DMSO)等稳定剂的存在下，防止因冰晶形成而造成细胞损伤，并促进细胞存活。
这种液氮方法已经成功地保存了许多无法通过冻干保存的物种，大多数物种可以在这种条件下存活10至30年而不发生特征变化;然而，这种方法是昂贵的。
冻干(冻干)
大多数生物在冻干(冷冻干燥)后可以成功保存。冷冻干燥是从冷冻产品中除去水和其他溶剂的过程通过升华。升华发生在冻结的液体直接变成气态而不进入液相的时候。
冷冻干燥过程的结果稳定，易于再水化的产品。这个过程包括三个步骤:
- 预冷冻产品实验室冰箱为了形成冻结结构，
- 初级干燥去除大部分水分，
- 并二次烘干去除束缚水。
建议使用慢速冷却，因为这将导致垂直冰晶结构的形成，从而允许更有效的水从冷冻产品升华。冻干产品吸湿，在储存期间必须防止受潮。在这种条件下，微生物细胞脱水，代谢活动停止;结果，微生物进入休眠状态，并保持活力数年。然后将冻干或冻干的纯培养物密封并在冰箱中4°C的黑暗环境中保存。
冷冻干燥法是培养采集中心最常用的技术。用这种方法保存的许多种类的细菌在30多年的时间里都保持了活力和不变的特性。
冻干的优点
- 只需要最小的存储空间;在一个小范围内可以储存数百个冻干培养物。
- 小瓶可以方便地通过邮件发送到其他微生物实验室时，包装在一个特殊的密封邮寄容器。
- 冻干培养物可以通过打开小瓶，加入液体培养基，并将再水化的培养物转移到合适的生长培养基中来恢复。
从冻干贮存条件中回收细菌
要恢复隔离，请遵循如下所述的逐步步骤;
- 将冷冻的培养物从冰箱中取出，放在干冰上或酒精和干冰浴中;
- 转移到实验室安全柜或洁净区(如果没有安全柜)。
- 用无菌环刮取培养物最上面的部分
- 转移到生长介质中，不要污染瓶的顶部或内部。
- 在液体完全解冻之前重新关闭瓶子，并将瓶子放回冷冻室;通过精心的技术，同一个小瓶可以成功地进行多次转移。
- 35-37℃孵育18-24小时;在使用分离物接种试验之前，至少进行一次传代培养。
石蜡方法
用矿物油覆盖培养液保存生物体是维持细菌和真菌纯培养物的一种简单而经济的方法。例如，PDA斜面可以覆盖无菌矿物油，并在室温下储存，以长期储存真菌。
在这种方法中，将无菌液体石蜡倒在培养物的斜面上，并在室温下直立保存。石蜡层确保了厌氧条件，防止了介质脱水。这种条件有助于微生物或纯培养物保持休眠状态;因此，培养物可以保存数月至数年(因物种而异)。
过程
- 准备短斜的心脏灌注琼脂管。对于挑剔的生物，加入新鲜的本地或加热的血液。
- 在热空气中(170°C, 1小时)消毒矿物油(液态石油)。
- 在琼脂斜面上培养纯培养物。
- 当生长良好时，在倾斜顶端上方约1厘米处添加无菌矿物油。
- 传代时，从油下刮生长。
- 在室温下储存。6-12个月后转移。
这种方法的优点是，我们可以用转移针去除油下的部分生长，接种新鲜培养基，仍能保存原有的培养物。这种方法的简单性使它很有吸引力，但应变的特性仍然可能发生变化。
