脲酶是一种组成性表达酶，可将尿素水解为二氧化碳和氨。许多生物，尤其是那些感染尿道的生物，都有一种脲酶，这种酶能够在有水的情况下分解尿素，释放出氨和二氧化碳。
氨与二氧化碳和水结合形成碳酸铵，使介质变成碱性，使指示剂苯酚从原来的橙黄色变成亮粉色。
脲酶试验所用培养基:任何尿素培养基，琼脂(克里斯滕森尿素琼脂)，或肉汤(斯图亚特尿素肉汤)。脲酶试验培养基可以是一种单一培养基，也可以是一种类似于动态吲哚脲酶(MIU)试验的部分培养基。这些媒体的组成和准备在这篇博客文章的最后给出。
微生物检测
- 答:尿素检测是一系列检测的一部分，用于鉴别以下疾病。
- 革兰氏阴性肠道病原体，包括鼠疫spp。
- 挑剔的革兰氏阴性棒-布鲁氏菌，幽门螺旋杆菌，而且巴斯德菌
- 革兰氏阳性棒- - - - - -棒状杆菌属而且红球菌属spp。
- 酵母,隐球菌spp。
- B.直接，这个测试是在胃活检样本上进行的，以检测幽门螺旋杆菌
脲酶试验程序
克里斯滕森尿素琼脂
- 用18-24小时纯培养的大量接种物在整个斜面上进行条纹(不要刺穿臀部，因为它将作为颜色控制)。
- 在35°C下培养盖松动的试管。
- 在6小时和24小时观察斜面的颜色变化，除非指定更长的孵育时间。
左:正，右:负
斯图尔特的尿素肉汤
- 用18-24小时纯培养的高浓度接种物接种肉汤
- 轻轻摇动试管，使细菌悬浮
- 在35°C下用松盖培养试管。
- 在8、12、24小时观察肉汤的颜色变化。
结果及解释
能快速水解尿素的生物(普罗透斯spp。摩根氏菌属morganii,和一些Providencia stuartii菌株)会在1或6小时内产生强烈的阳性反应;延迟阳性生物(例如:克雷伯氏菌spp和肠杆菌属物种)将产生弱阳性反应在6小时的孵化，这将是强烈的进一步孵化。如果微生物是脲酶阴性，培养基将保持淡黄色。大肠杆菌。
在常规诊断实验室，脲酶检测结果在24小时内读取。
- 如果生物体产生脲酶，斜面的颜色会从浅橙色变成品红。
- 如果生物不产生脲酶，琼脂倾斜和臀部保持浅橙色(中保留原色)。
如果使用斯图亚特尿素肉汤;快速脲酶阳性生物(普罗透斯spp。摩根氏菌属morganii)会在孵育8-24小时内产生强烈的阳性反应，但会延迟阳性生物(例如，肠杆菌属)由于该介质缓冲能力强，不会产生正反应。
脲酶试验的诊断应用
- 脲酶试验可作为鉴定若干属和种的一部分肠杆菌科包括普罗透斯和克雷伯西拉．识别也很有用隐球菌物种,布鲁氏菌，幽门螺杆菌。
- 脲酶试验有助于鉴别普罗透斯(脲酶阳性)，并将其与肠杆菌科的其他非乳糖发酵成员区分开来。
- 脲酶试验用于存在的推定证据幽门螺杆菌在组织活检材料中。这是通过将部分粉碎的组织活检材料直接放入脲酶肉汤中来完成的。尿素酶测试阳性被认为存在幽门螺杆菌。市面上也有尿素酶琼脂试剂盒。
- 快速脲酶测试可以用来区分酵母，白色念珠菌,新型隐球菌．推定识别c . neoformans可能基于快速脲酶生产，而白色念珠菌不。
- 尿素呼气试验：一种常见的非侵入性检测方法幽门螺杆菌也是基于脲酶活性。这是一个高度敏感和特异性的测试。
脲酶阳性生物名称
- 变形菌族(变形杆菌，摩氏摩根菌，而且一些Providencia stuartii菌株）
- 隐球菌仕达屋优先计划
- 棒状杆菌属仕达屋优先计划
- 幽门螺杆菌
- 布鲁氏菌仕达屋优先计划
注意:记住脲酶阳性生物的助记法:类似的助记符氧化酶阳性生物PVNCH)
- P: Proteus
- 你:你reaplasma
- N: Nocardia
- C:Cryptococcus neoformans/ Corynebacterium仕达屋优先计划
- H: Helicobacter幽门
限制
- 有些生物会迅速分解尿素(布鲁氏菌而且幽门螺旋杆菌)，而其他人反应缓慢。
- 当从含有蛋白胨的介质中进行过夜测试时，碱性反应可能不是由于脲酶，而是由于蛋白胨的水解。
- 尿素对光敏感，可自水解。在2 - 8°C的暗处保存。
- 如果介质没有缓冲，测试就不那么敏感。
克里斯滕森尿素琼脂的组成
| 成分 | 克/升 |
| 蛋白胨 | 1克 |
| 葡萄糖 | 1克 |
| 氯化钠 | 5克 |
| 磷酸钾，单碱 | 2 g |
| 尿素 | 20克 |
| 酚红 | 0.012克 |
| 琼脂 | 15至20克 |
克里斯滕森尿素琼脂的制备
- 将前六种成分溶解在100毫升蒸馏水中，并用过滤器消毒(孔径为0.45毫米)。
- 将琼脂悬浮在900毫升蒸馏水中，煮沸至完全溶解，并在121°C和15 psi的压力下高压灭菌15分钟
- 将琼脂冷却至50-55°C
- 无菌地向冷却的琼脂溶液中加入100毫升经过滤灭菌的尿素基，并充分混合
- 每个无菌试管(13 x 100毫米)分配4到5毫升，在冷却过程中倾斜试管直到凝固(最好有一个长倾斜和短对接)。
斯图亚特尿素肉汤的组成与制备
| 成分 | 克/升 |
| 酵母提取物 | 0.1克 |
| 磷酸钾，单碱 | 9.1克 |
| 磷酸钾，二碱性 | 9.5克 |
| 尿素 | 20克 |
| 酚红 | 0.01克 |
- 将所有成分溶解在1升蒸馏水中，过滤消毒(孔径为0.45毫米)。
- 在无菌试管(13X100毫米)中加入3毫升准备好的肉汤。
制备好的培养基(克里斯滕森尿素琼脂和斯图亚特尿素肉汤)将呈黄橙色。一旦准备好，不要再加热介质，因为尿素会分解。配制好的培养基可在4至8°C的冰箱中储存，直至需要。
参考资料及进一步阅读
- 贝尼塔·布林克2010。脲酶试验方案。美国微生物学会
- 临床微生物程序手册，第四版。(2016)。美国微生物学会。https://doi.org/10.1128/9781555818814
