直接ELISA (Sandwich ELISA)法检测抗原

酶联免疫吸附试验(ELISA)是一种非常敏感的检测特异性抗体或抗原的试验。直接ELISA是一种利用特定的固定抗体检测抗原的方法

直接ELISA采用单克隆抗体对;一种抗体叫做捕获抗体,结合到平板和抗原。另一种抗体叫做探测器抗体,也与抗原结合,并与一种酶结合。

这种利用成对抗体的方法也被称为夹心ELISA。捕获抗体和检测抗体结合两个不同的抗原表位或区域。

三明治原理ELISA试剂盒

一种已知抗体被吸附在微滴度板的孔内。在冲洗掉多余的抗体后,加入怀疑含有抗原的样品。

夹心ELISA

接下来是酶联抗体(探测器抗体)能与抗原发生反应的。这种酶参与产生特定的颜色。如果抗原存在于井中,酶联抗体就会与抗原结合并被保留。

然后加入酶的无色底物。颜色(酶-底物反应后)显示抗原的存在。产生的颜色的强度表明样品中存在的抗原的数量,这可以用ELISA阅读器定量确定。

直接ELISA法

附着抗原特异性抗体(捕获抗体)到固相表面。(即,针对特定感染因子的抗体被牢固地固定在固体基质上,可以是微量稀释托盘内壁的内部,也可以是球形塑料或金属珠或其他固体基质的外部)

抗体连接

试样是补充道。如果抗原存在于待测液体中,则形成稳定的抗原-抗体复合物;未结合的抗原通过清洗彻底去除。

抗原和抗体

第二个抗体(检测抗体)针对所寻找的抗原被添加到系统中。这种抗体与酶络合的如碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶。

Ag ab和eab

固体基质上的抗原与第二抗体结合,与中间的抗原形成三明治。通过清洗去除未结合的标记抗体。

添加显色酶底物。酶-底物的水解引起颜色的变化,并完成了这一作用。呈现的颜色与测试标本中抗原的含量成正比。

色彩的发展

结果及解释

颜色的强度与抗原的含量成正比。检测样品中抗原的含量可以用酶联免疫吸附测定仪测定。

Acharya Tankeshwar

您好,感谢您访问我的博客。我是Tankeshwar Acharya。写博客是我的爱好。作为助理教授,我在尼泊尔的PAHS教授医学和护理专业的学生微生物学和免疫学。澳门金博宝188官方网站我在帕坦医院做了10多年的微生物学家。

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