酶免疫分析(EIA)，酶联免疫吸附试验(ELISA)，是最广泛使用的免疫分析类型。酶联免疫吸附试验是一种快速检测抗原或抗体的存在和数量在样本中。
间接ELISA用于筛选患者，以进行检测或定量抗体(Ab)抗病毒、细菌等抗原(Ag)．例如，HIV抗体、风疹病毒抗体等的检测，都是用间接ELISA法进行的。直接ELISA法用于检测激素(如人绒毛膜促性腺激素(HCG)在一些妊娠试验促黄体生成素(LH)、药物、病毒和细菌抗原。
ELISA之所以如此命名，是因为该测试技术涉及到酶系统和免疫吸附剂。ELISA由与酶结合的抗体组成;酶仍然能够催化反应，产生可见的最终产物。这个词酶联指一种酶与抗体的共价结合。
使用酶作为标签有几个优点。
- 酶本身在酶联免疫吸附试验中不发生变化。它可以催化许多底物分子的反应，大大放大反应，增强检测。
- 酶偶联抗体是稳定的，可以储存较长时间。
- 有色最终产物的形成可以直接观察反应或自动进行光谱光度测量的阅读。
ELISA试验的显著特征
酶联免疫吸附试验因其简单、灵敏等优点，越来越多地应用于抗原(感染源)或抗体的检测。它和……一样敏感放射免疫检定法(RIA)并且只需要几微升的测试试剂。目前，它已广泛应用于检测各种抗体和抗原，如激素、毒素和病毒。
- ELISA检测具有较高的敏感性和特异性
- 定量ELISA检测结果直观
- 一次可以进行大量的测试
elisa是专为一次筛查大量标本而设计的，适合用于监测和集中输血服务。 - 用于酶联免疫吸附试验的试剂是稳定的，可以在地区和农村实验室分发，但由于酶联免疫吸附试验需要精密的设备和熟练的技术人员进行测试，因此在某些情况下使用受到限制。
酶联免疫吸附试验所需材料
- 移液器，清洗系统，ELISA板读取器:读取器，清洗器和移液器可作为手动或自动系统。影响设备选择的主要因素之一是正在运行的测试样品的数量和类型。
- 测试所需试剂-包括在试剂盒中(涂布板，样品稀释剂，对照品，洗涤浓缩物，共轭物，底物，停止液)
- 涂板: 96孔板由聚苯乙烯制成，表面涂有灭活抗原或抗体。平板的功能是保存固定的抗原或抗体。样本中的抗原或抗体会与平板结合。这种涂层作为样本中抗体或抗原的结合位点。
- 控制:每个试剂盒都提供阴性和阳性对照。控制有助于规范或标准化每个板块。对照也用于验证测定方法和计算样品结果。控件可以预先稀释，并随时可以使用。(具体说明请参阅工具包)。
- 配合:ELISA偶联物是酶标记抗体，特异性反应板结合样品分析物。未结合的缀合物在孵育后和加入底物之前被洗去。
- 洗集中:它作为含有洗涤剂的缓冲溶液，从板上清洗未绑定的材料。(并非所有的检测试剂盒都含有浓缩洗涤液;在这种情况下，蒸馏水可以用来清洗;具体说明请参考套件说明书)
- 停止解决方案:它阻止酶与底物的反应和显色。
酶联免疫吸附试验原理
为检测抗原或抗体而开发的大多数ELISA方法都是使用相应的抗体或抗原，这些抗体或抗原被牢固地固定在固相上，如聚氯乙烯板或聚苯乙烯管的塑料表面。这样的系统也被称为固相免疫吸附测定(SPIA)。在微量滴定板中加入待测样品，如果待测样品中存在Ag或Ab，则会发生Ag-Ab反应(与固定的Ab或Ag)。随后将酶标记抗体添加到反应混合物中，该反应混合物将与测试抗原或测试抗体的Fc部分结合。酶系统由;
- 一种酶:马萝卜过氧化物酶，一种被标记或连接到特定抗体上的碱性磷酸酶。
- 特定的底物：
- 邻苯二胺盐酸盐过氧化物酶
- P硝基苯磷酸盐(PNPP)-碱性磷酸酶
在抗原-抗体反应后加入底物。酶催化(通常水解)底物给出一个颜色端点(在碱性磷酸酶的情况下是黄色化合物)。颜色的强度与测试样品中存在的抗体或抗原的数量成正比，可以使用ELISA阅读器进行量化。
蓝蓝酶联免疫吸附试验(LAM ELISA)用于检测脂肪阿拉伯甘露聚糖(LAM)，一种主要的人体表面抗原结核分枝杆菌,从疑似结核病患者的尿液和/或痰中提取。与常规ELISA相比，该方法的灵敏度提高了50-100倍。
ELISA类型
直接ELISA
直接ELISA检测样本中抗原的存在．微量滴度孔首先被所寻找抗原特异性的同源抗体包被。然后在井眼上涂一层封堵剂，以防止非特异性组分结合。被测定的样品被添加到井中。如果抗原存在，它就会与包裹在孔表面的抗体发生反应;如果不存在，则不发生反应。
在这种形式的ELISA中，酶联(偶联)抗体对所寻找的抗原也是特异性的。当加入到井中，如果抗原存在，它就会与抗原结合。等待酶联抗体与抗原反应一段时间后，清洗井以去除任何未结合的酶联抗体(加入底物时会产生假阳性)。在添加底物时，颜色的变化是底物酶促转化为其产物的证据，这表明存在抗原。
间接ELISA
间接ELISA检测样品中抗体的存在。在这种类型的ELISA中，微量滴度孔被被寻找的抗体特异性抗原和阻断剂所包裹。被检测的样本被添加到孔中，如果抗体存在，它将与包覆在孔上的抗原发生反应;如果不存在，则不发生反应。
在这种情况下，酶联抗体是一种抗人免疫球蛋白抗体。当加入到孔中，如果样品中存在抗体，它就会与抗体结合。与直接ELISA一样，未结合的酶联抗体被冲洗掉，以防止出现假阳性结果。添加酶底物，颜色变化表示检测阳性。
使用
酶联免疫吸附试验在微生物学的各个领域有着广泛的应用。它用于筛选或量化患者标本中的抗原或抗体。
- 细菌学
- 直接ELISA法用于检测咽拭子中的A群链球菌抗原、粪便中的艰难梭菌外毒素和食物样本中的肉毒毒素。
- 抗体检测试验可用于诊断落基山斑疹热(由病毒引起)Rickettasia rickettsii）.
- 病毒学
- 直接ELISA检测用于检测患者各种标本中的病毒抗原。ELISA试验常用来检测P24抗原(HIV诊断)、HBsAg(乙型肝炎诊断)、流感病毒抗原检测、轮状病毒抗原检测。
- 间接ELISA检测在患者血清中检测出针对丙型肝炎病毒、基孔肯雅病毒、寨卡病毒、人t细胞嗜淋巴病毒和HIV的特异性病毒抗体。
- 真菌学:抗原检测试验可用于组织胞浆菌病的诊断。此测试检测的存在组织胞浆菌属抗原在病人的组织样本中。
- 寄生虫学:在寄生虫学中，用直接ELISA法检测贾第虫属抗原和蛋白特异性抗原恶性疟原虫．间接ELISA法检测IgM抗体锥虫属brucei抗原(用于诊断非洲锥虫病)和抗有钩绦虫．
