结核分枝杆菌感染的实验室诊断

结核分枝杆菌MTB是人类结核病(TB)的病原体。它是一种单独或成组排列的微弯曲杆。结核分枝杆菌生长非常缓慢,需要6周才能明显生长。分枝杆菌细胞壁含有霉菌酸并给出了抗酸的特征。

罗伯特·科赫为这种生物命名M.tuberculosis在1886年。

结核分枝杆菌感染的实验室诊断

示例:痰、肺泡、尿(肾结核)、血、液、组织和洗胃(儿童)。样品可以直接使用(如无菌的体液),也可以去污后使用(如未无菌的痰)。一些样品在用于培养、动物接种和有时在显微镜下产生更好的结果之前被浓缩。


活跃生长杆菌的直接检测

感染的直接检测包括镜检、培养、抗原检测、核酸检测。

显微镜

镜检是检测结核杆菌最快速的诊断方法。标准光学显微镜和荧光显微镜通常用于检测。在光学显微镜下,M.tuberculosis染色时为红粉红色长杆菌或微弯曲杆菌AFB染色(ziehl - nielsen染色)

耐酸染色灵敏度低;大约50%的“涂片阴性”样本被发现为“培养阳性”。

荧光显微镜下的分枝杆菌

当使用荧光显微镜时,抗酸生物在紫外线照射下,用罗丹明金胺染色当被吖啶橙染色时,浅绿色背景中的亮橙色荧光杆菌。

文化

培养是检测结核杆菌较为敏感的方法,是进行抗菌药物敏感试验和基因分型所必需的。

结核分枝杆菌菌落的近景
典型的结核分枝杆菌琼脂培养基中的菌落

在用NaOH处理消化样品并通过离心浓缩后,将样品接种到富含蛋白质的培养基中(如Lowenstein-Jensen介质或Middlebrook培养基),在37°C下孵育长达8周。M.tuberculosis显示干的,粗糙的,奶油状的或浅黄色的菌落在Löwenstein-Jensen媒体。

在液体培养基上,结核杆菌在表面生长,形成皱巴巴的膜。

分枝杆菌在液体培养基中比在固体培养基中生长得更快、更可靠。

如果在BACTEC培养基中接种,生长在大约2周内检测到放射性二氧化碳的产生。

从培养基推测的菌落是进一步确认通过生188金宝搏官网下载app化试验,如烟酸试验、硝酸还原酶试验、吐温80水解,芳基磺化酶试验,和脲酶试验M.tuberculosis显示烟酸呈阳性,硝酸盐还原、尿素酶测试。

分子诊断

由于其增长速度缓慢结核分枝杆菌复杂(MTBC)杆菌,分子技术已成为快速检测结核病的基石。

核酸扩增试验(NAAT)

核酸扩增试验(NAAT)识别病原以及提供有关的信息耐药性在收到样品后的几天甚至几个小时内。聚合酶链反应是NAAT的通用格式,其他方法包括;连接酶链反应、应变位移扩增、环介导等温扩增(LAMP)、转录介导扩增。

分子测试188.博金宝 提供有关耐药性的信息;

  • 过氧化氢酶基因(介导异烟肼抗性),
  • RNA聚合酶基因(介导对利福平的耐药性)。

Xpert MTB/RIF检测

GeneXpert MTB/RIF检测

GeneXpert MTB/RIF检测是一种核酸扩增试验这同时检测DNA结核分枝杆菌复合物(MTBC)与利福平耐药性(RIF)(即rpoB基因突变)在2小时内完成。

了解更多关于Xpert MTB/RIF检测的信息

抗原检测方法

MTB抗原检测提供了结核病的直接证据。脂拉氨基甘露聚糖(LAM)是一种很有前途的结核病诊断抗原检测靶点,并用于包括尿液在内的各种体液中结核杆菌的快速检测。除此之外,其他抗原如65kd和14kd抗原的检测也被广泛应用。

结核分枝杆菌的间接检测方法

它包括通过结核菌素皮肤试验(TST)和干扰素γ释放试验(IGRAs)检测免疫反应。这些测试在潜伏性结核病和活动性结核病中都呈阳性,因此任何测试呈阳性的人都必须评估是否存在活动性结核病。

结核菌素皮肤试验或PPD试验

曼托克斯结核菌素试验
曼托克斯结核菌素试验
(图片来源:CDC/PHIL)

PPD(纯化蛋白衍生物)测试确定某人是否对结核分枝杆菌产生了免疫反应。如果某人目前患有结核病,如果他们过去曾接触过结核病,或者如果他们接种了卡介苗,就可能发生这种反应。推荐标准结核菌素试验是Mantoux试验,将0.1 mL含有5tu(结核菌素单位)PPD的液体注射到前臂皮肤最上层,并在注射后48-72小时内观察是否有硬化(局部肿胀)和数量。

你可以查阅:结核菌素皮肤试验(Mantoux试验):原理,程序,结果和局限性

干扰素释放测定(IGRA)

干扰素γ释放测定(IGRA)图片来源:invitro-test.com
干扰素释放测定(IGRA)
图片来源:invitro-test.com

干扰素γ测定克服了结核菌素试验解释所面临的困难。干扰素γ释放测定的两种可用格式是;的Quantiferon-TB黄金而且T斑点结核试验.IGRA检测是基于MTB抗原,如早期分泌抗原靶6 (ESAT-6)和培养滤液蛋白10 (CFP-10)刺激宿主产生干扰素γ (IFN-γ)的能力。

测量细胞释放的干扰素-γ的量。结果可以定性地(阳性的、阴性的或不确定的)和定量地解释。卡介苗免疫不影响IGRA检测结果,因为这里使用的抗原是特异性的结核分枝杆菌并且卡介苗中不存在。

参考文献和进一步阅读

尼莎Rijal

我在尼泊尔国家公共卫生实验室(NPHL)担任微生物学家,这是尼泊尔卫生服务部(DoHS)下属的政府国家参考实验室。我工作的关键领域是细菌学,特别是抗菌素耐药性。

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