NNN介质:Composition, Preparation, Results

NNN (Novy-MacNeal-Nicolle)是分离该属病原的常用培养基利什曼虫,导致利什曼病。这种生物在适当的培养基中培养产生一种可运动的细胞外形式，称为促生体。

各种各样的媒体被用于文化的传播利什曼虫。这些可分为三个主要类别:半固态，双相和液体。其他体外培养基包括RPMI 1640、Evans和Schneider。

NNN介质是由诺维，麦克尼尔和尼科勒修改．NNN介质由两相组成，血琼脂基质(A部分)和洛克溶液(B部分)。该培养基由血液琼脂和覆盖培养基组成。血琼脂基质是一种营养丰富的培养基，支持挑剔的生物生长，如利什曼虫而且锥虫属。所述标本接种到所述双相介质的液相中并孵育。无鞭虫大约在24小时内转变为促鞭虫。

如果您在美国，CDC可以提供准备使用的NNN培养基。你可以接种样品(室温保存)，并尽快通过隔夜邮件邮寄。疾控中心将样本培养四周，如果培养呈阳性，就进行同工酶研究，以确定寄生虫的种类。

文化的用途:

• 疾病诊断:培养不是一种常见的做法在诊断实验室，因为他们执行吉姆萨染色检测无散体形式利什曼虫或使用血清学测试rK39, DAT为了使诊断(内脏利什曼病)。但在不明确/不确定的病例中，培养可以确认诊断。
• 用于血清学研究:离体培养利什曼虫Promastigotes是获得许多用于血清学研究的生物体所必需的。
• 研究工作:研究利什曼原虫的抗原结构、生化特性和感染能力。

媒体组成:

商业供应商提供现成的NNN介质，您可以购买。媒体的成分是:

部分(成分gms /升)

• 肉提取物3.000
• 动物组织消化5 000
• 氯化钠8.000
• 琼脂15.000

最终pH值(25°C) 7.3±0.2

B部分(成分gms /升)

• 氯化钠8.000
• 氯化钾0.200
• 氯化钙0.200
• 磷酸二氢一钾0.300
• 葡萄糖2.500

最终pH值(25°C) 7.0±0.2

制作文化介质/管材

商业供应商大多供应脱水介质(以自由流动的粉末形式)。您可以按照以下步骤制备现成的培养基。

一个部分:

1. 将31克悬浮在1000毫升蒸馏水中。
2. 加热至沸腾，使介质完全溶解。
3. 在15磅压力下(121°C)高压灭菌15分钟。
4. 冷却至45°C，无菌加入无菌去纤维兔血或人血。
5. 混合均匀后按5毫升的量在试管中或25毫升的量在烧瓶中分配。
6. 让管状介质在倾斜位置冷却。

B部分:

1. 将11.2克B部分悬浮在1000毫升蒸馏水中。
2. 加热至沸腾，使介质完全溶解。
3. 在15磅压力下(121°C)高压灭菌15分钟。
4. 冷却后，加入大约2毫升的试管或10-15毫升的烧瓶在固化的A部分介质。

储存:

将制备好的培养基冷藏，直到使用为止(稳定2-4周)，并在接种前将其放至室温。

接种:

1. 接种标本(脾脏抽吸、骨髓活检或淋巴结抽吸)入两相介质的液相。
2. 孵化的°C第21到26四个星期。四天后检查生物体的生长和可能的真菌污染，并在接下来的四天中继续每隔四天进行一次周。

结果:

如果呈阳性，则在培养基中可见到有机体的繁茂生长。染色污渍培养物滤液自由观察，去鞭毛利什曼虫显微镜下的Promastigote。