休和莱夫森在1953年发明了氧化-发酵(OF)试验。他们开发了OF媒体区分氧化细菌(只在有氧条件下从碳水化合物中产生酸)还有发酵细菌(在好氧和厌氧条件下都能产生酸)。
糖化微生物通过发酵或氧化的方式降解葡萄糖。发酵的最终产物是在常规发酵试验介质中检测到的相对较强的混合酸。但是葡萄糖氧化降解形成的酸极弱且较少，检测需要使用Hugh和Leifson的更灵敏的氧化发酵培养基。这种培养基是通过在检测发酵的培养基中增加葡萄糖的量，并减少蛋白胨的量制成的。
OF媒介休和莱弗森不同碳水化合物发酵介质如下:
- 琼脂浓度从3%降低到2%，使其成为半固体(这有助于确定生物运动性s)．
- 蛋白胨的浓度由11%降低到2%．(减少蛋白胨代谢产生的碱性产物的量，从而降低这些产物的中和作用)。
- 碳水化合物浓度提高0.5%至1.0%(培养基中葡萄糖浓度的增加增加了这些弱酸的产生，达到了可以用溴百里酚蓝指示剂检测到的水平。)
原则
氧化-发酵试验确定某些革兰氏阴性菌是否通过发酵或有氧呼吸(氧化)代谢葡萄糖。在厌氧发酵过程中，丙酮酸根据发酵类型的不同被转化为各种混合酸。发酵过程中产生的高酸浓度会将OF介质中的溴百里酚蓝指示剂由绿色变为黄色在有或没有氧气的情况下。
某些非发酵革兰氏阴性菌通过有氧呼吸代谢葡萄糖，在代谢过程中只产生少量的弱酸糖酵解和克雷布斯循环．蛋白胨的减少和葡萄糖的增加有利于检测由此产生的弱酸。添加磷酸二钾缓冲液进一步促进酸的检测。
使用
OF试验用于确定革兰氏阴性菌是否通过发酵氧化代谢碳水化合物，或非糖水解(不能使用介质中的碳水化合物)。
媒体
休和莱夫森的基本介质;组成部分如下:
- 氯化钠:5.0克
- 磷酸二钾:0.3 g
- 蛋白胨:2.0 g
- 溴百里酚蓝:0.03 g
- 琼脂:3.0 g
- 葡萄糖:10克
- 水:1000毫升
pH值应调整至7.1高压灭菌法．介质在121°C高压灭菌15分钟后，afilter-sterilized将10%碳水化合物溶液无菌添加到培养基中至最终浓度为1%。
过程
- 将两管of测试介质与测试生物体用一根直线刺穿管的“底部的一半”来接种。
- 用1厘米厚的无菌矿物油或液体石蜡覆盖每一对的一管(它通过防止氧气扩散在管中产生厌氧条件)，让另一管暴露在空气中。
- 两根试管在35°C下孵育48小时(生长缓慢的细菌可能需要3 - 4天才能观察到结果)
解释
通过黄色的外观来检测介质中的酸的产生。在氧化生物的情况下，颜色的产生可能首先注意到介质的表面附近。
以下是反应模式:
| 打开(有氧)管 | 有盖(厌氧)管 | 新陈代谢 |
| 酸(黄色) | 碱性(绿色) | 氧化 |
| 酸(黄色) | 酸(黄色) | 发酵 |
| 碱性(绿色) | 碱性(绿色) | 非糖溶性(未代谢的葡萄糖) |
- 发酵的结果:双管(开口管和有盖管)产酸。产生的酸将pH值指示物溴百里酚蓝从绿色变成黄色。如。大肠杆菌
- 氧化的结果:酸的产生在开管(好氧)而不是油覆盖管(厌氧)表明氧化结果。通过氧化代谢代谢葡萄糖的非发酵细菌产生氧化结果。如。铜绿假单胞菌
- 非糖溶性(OF阴性):非糖溶菌的OF结果为阴性。阴性结果表明，在被油覆盖的管中没有颜色变化，在某些情况下，pH值(pH 7.6)增加，使溴百里酚蓝在打开的管顶部从绿色变为蓝色。pH值的增加是由于细菌分解介质中的蛋白胨(蛋白质)产生胺。
如。粪产碱杆菌属。
质量控制
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