传播板技术是一种可行的计数方法，用于板的液体样品，以分离或计数该样品中的细菌。一个完美的平板技术将导致可见和可数的菌落均匀分布在平板上。
(图片来源:Ref-1)
为了从铺板技术中获得最佳效果，人们必须小心;
- 精确稀释使用吸量管(掌握连续稀释技术)．
- 应用平衡散布技术，使用玻璃散布器将接种物均匀地散布在琼脂表面。
- 尊重琼脂接种和传播之间必要的“短”时间间隔
每个活的生物生长和分裂产生一个菌落，称为菌落形成单位(CFU)。
原则
液体样品在一系列装有无菌水或生理盐水的管子中稀释。从每个试管中取出固定体积的样品，通常为0.1 mL，放在琼脂表面。然后使用无菌弯曲的玻璃棒将样品均匀地涂抹在琼脂表面。
在孵育之后，分散的细胞发育成孤立的菌落。计数板上菌落的数量并乘以稀释因子，以计算样品中最初存在的可活生物的总数。
在这种方法中，要测试的物质(如果不是液态)被研磨并溶解在合适的液体介质中。然后用10倍连续稀释稀释样品，并在适当的介质中镀上。
需求
- 密封瓶
- 螺旋盖试管
- 无菌吸量管
- 无菌弯曲的玻璃棒(弯曲成曲棍球棒的形状)，或市售的无菌延展器
- 中:平板计数琼脂或营养琼脂．平板表面不能太潮湿，因为添加的液体必须渗透进去，这样细胞才能保持静止。
- 酒精(乙醇)
铺板技术程序
答:连续稀释
- 准备一系列至少6个试管，包含9毫升无菌蒸馏水。
- 使用无菌移液管，加入1ml样品到第一套试管中。标记为101。
- 把管子倒过来旋转几次，把里面的东西混合好。
- 从第一根试管中取1ml样本，转移到第二根试管中。标记为10－2．
- 重复上述步骤，所有剩余的试管都贴上标签直到10－6．
b .电镀
- 吸管了0.1毫升*从适当的所需稀释系列到琼脂板表面的中心。
- 浸入l型玻璃吊具(冰球棍)成乙醇。乙醇被用来消毒玻璃吊具。
- 用火焰把玻璃摊在本生灯．
- 用低温酒精燃烧的玻璃棒铺展器将样品均匀地铺在琼脂表面，并以45度角小心地旋转下面的培养皿o同时。
- 37°C孵育24-48小时。
*注:液体体积≤0.1 ml。避免>0.1 ml的体积，因为过量的液体不能吸收，可能会导致菌落形成时合并，使其难以计数。
计算结果
如果你的传播板是成功的，孵化后，你将得到分离的可计数菌落均匀分布在琼脂表面。计数菌落数量，并乘以适当的稀释因子，以确定菌落形成单位(CFU)存在于原始样品中每毫升。
CFU/ml =(菌落数×稀释因子)/培养皿体积
例如，假设10的盘子4稀释得到了27个菌落。那么，1ml原始样品中的细菌数量可以计算如下:
细菌/ml = (27) × (10)4) x 10 = 2.7 × 106
(我们用了0.1mL的琼脂板，所以乘以了10)
与浇板技术相比的优点
- 只有表面菌落才会发展
- 生物体不需要承受液体琼脂的温度。
使用
- 不像平板划线分离技术该技术可以定量地确定样品中存在的细菌数量。铺板技术最常应用于食品或任何其他样品的微生物检测，或分离和识别存在于环境样品(如土壤)中的各种微生物菌群。
参考资料和进一步阅读
- 桑德斯ER。无菌实验室技术:电镀方法。J Vis Exp．2012, (63): e3064。2012年5月11日出版。doi: 10.3791/3064
