药品或医疗产品的无菌测试有助于评估它们是否没有污染微生物。这些产品应该通过无菌测试，因为未经消毒的医疗产品可能对健康有害。
无菌是指完全没有微生物，包括高度耐药的细菌内生孢子。部分或整个产品在合适的培养基中培养。不同的药典，如USP(美国药典)，英国药典(BP)和印度药典(IP)的建议液体巯基乙酸酯介质(FTM)、代用巯基乙酸酯培养基(ATM)和大豆酪蛋白消化培养基(SCDM)作为无菌检验的适宜培养基。
无菌检测培养基
用于无菌测试的三种介质是:
液态硫代乙酸酯介质(FTM)
液态巯基乙酸酯培养基有利于好氧菌、厌氧菌和嗜微菌的生长。用于药品的无菌检验。用于检查透明液体或水溶性物质，并将血液储存在血库中。在30-35℃有氧孵育。
| 成分 | Gms /升 | 使用 |
| 琼脂 | 0.75克 | 支持需氧菌和厌氧菌的生长 |
| l -胱氨酸 | 0.5克 | 降低氧化还原电位 |
| 氯化钠 | 2.5克 | 渗透平衡 |
| 葡萄糖 | 5.5克 | 细菌繁殖的生长因子 |
| 酵母 | 5克 | 细菌繁殖的生长因子 |
| 胰脏消化酪蛋白 | 15克 | 氮和碳的来源 |
| 巯乙酸钠 | 0.5克 | 还原剂，中和汞的毒性作用 |
| 刃天青钠 | 1毫升 | 颜色指示器 |
| 蒸馏水 | 1000毫升 | 作为溶剂 |
最终pH值(25°C): 7.1±0.2
替代硫代乙酸酯介质(ATM)
替代硫代乙酸酯培养基用于浊稠产品的无菌检测。也可用于窄管中厌氧菌的测定。除了琼脂和再青嘌呤钠外，它的成分与FTM相似。孵育在30-35℃，厌氧。
| 成分 | Gms /升 | 使用 |
| l -胱氨酸 | 0.5克 | 降低氧化还原电位 |
| 氯化钠 | 2.50克 | 渗透平衡 |
| 葡萄糖 | 5.50克 | 细菌繁殖的生长因子 |
| 酵母提取物 | 5克 | 细菌繁殖的生长因子 |
| 胰脏消化酪蛋白 | 15克 | 氮和碳的来源 |
| 巯乙酸钠 | 0.5克 | 还原剂，中和汞的毒性作用 |
| 蒸馏水 | 1000毫升 | 作为溶剂 |
最终pH值(25°C): 7.1±0.2
大豆酪蛋白消化培养基(SCDM)
用大豆酪蛋白消化培养基(SCDM)进行无菌检验模具还有下层的细菌。在20-25℃有氧孵育。
| 成分 | Gms /升 | 使用 |
| 葡萄糖 | 2.5克 | 细菌繁殖的生长因子 |
| 磷酸氢二钾 | 2.5克 | 降低氧化还原电位 |
| 胰脏消化酪蛋白 | 17.0 | 氨基酸和多肽的来源 |
| 豆粕的木瓜消化 | 3．0 | 还原剂，中和汞的毒性作用 |
| 氯化钠 | 5．0 | 渗透平衡 |
| 蒸馏水 | 1000毫升 | 作为溶剂 |
最终pH值(25°C) 7.3±0.2
无菌检验方法
无菌检验是由膜过滤和直接接种法。
膜过滤
- 药品膜过滤无菌检测是美国药典(USP)、欧洲药典(Ph. Eur)和日本药典(JP)推荐的。
- 膜过滤是指通过孔径≤0.45 μm、直径约50mm的无菌膜过滤器过滤液体的方法。
- 样品通过膜过滤器过滤，流速为55-75ml/min，压力为70mmhg。膜过滤器使用硝酸纤维素过滤水、油和弱酒精溶液，使用醋酸纤维素过滤强酒精溶液。
- 如果有任何微生物的存在，那么它被保留在过滤器中。无菌条件下，通过膜过滤。然后无菌去除膜，切成两半。
- 然后将一半膜浸入100 ml大豆酪蛋白消化液中，20-25℃孵育14天。然后将另一半浸泡在100 ml硫代乙酸液中，在30-35℃下孵育14天。
需要检验质量的样品可以是任何一种形式。如果是水溶性的，需要用合适的稀释剂溶解。如果它是油溶性的，那么它就溶解在合适的溶剂中。膜过滤用于检测以下物质:
- 油或油性制剂
- 药膏在溶液中
- 可溶性粉末或抑菌、抑菌液
- 固体，无抗菌性能，不溶于介质
- 非抑菌固体不易溶于培养基
直接接种
在直接接种法中，使用无菌的培养基直接接种测试样品吸管或注射器。如果测试样品是抗菌剂，则通过向培养基中添加合适的灭活剂来中和。在20-25℃(大豆酪蛋白消化液)和30-35℃(硫代乙酸液)下孵育14天。
无菌检验中抗菌药物的失活
如果产品中含有防腐剂，或者测试样品是抑菌或抑菌的，请使用合适的无菌中和剂。那么它的作用就会失效，这样它就不会阻止污染微生物的生长。为了使抗菌剂失活，也可以进行稀释。当抗菌剂在培养基中被稀释时，它达到不再具有任何活性的水平。培养基中加入适当的中和剂或灭活剂。
| 抗微生物剂 | 灭活方法/灭活剂 |
| 青霉素 | 青霉素酶 |
| 头孢菌素 | Cephalosporinase |
| 链霉素 | 链霉素腺苷转移酶，链霉素磷酸转移酶 |
| 氨基糖甙类 | Acetyl-coenzyme一 |
| 巴比妥酸盐 | 在pH 7.0的培养基中稀释至0.2% |
| 磺胺类药 | P-aminobenzoic酸 |
| 山梨酸 | 稀释和聚山梨酸酯-80 |
| 叠氮化 | Azolectin |
| 氯霉素 | 氯霉素乙酰转移酶 |
| 有机酸 | 聚山梨醇酯- 80 |
| 酚类消毒剂 | 稀释 |
| 卤素 | 硫代硫酸钠 |
| 季铵化合物 | 卵磷脂+Lubrol或Tween 80 |
| 染料 | 膜过滤 |
| 重金属 | 巯基乙酸 |
| 酒精 | 由于不足1% |
| 其他抗生素 | 膜过滤 |
结果及解释
- 如果样品在孵育后没有微生物生长，则通过无菌检测。
- 如果观察到生长和浑浊，则重新进行测试。
- 如果在第二次测试中再次观察到增长，并且不能与第二次测试区分开来，则该测试失败。
- 但如果它能与第一次测试区分开来，那么第二次重新测试将使用两倍数量的样本进行。
- 如果在第二次重新测试中没有观察到增长，则通过测试。如果观察到增长，那么它就没有通过测试。
参考文献
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- 鲍曼(1969)。药品无菌检验。药学杂志，58(11), 1301 - 1308。https://doi.org/10.1002/jps.2600581102