Voges Proskauer (VP)测试:原理，程序，结果

Voges-Proskauer (VP)测试确定如果一个生物从葡萄糖发酵中产生乙酰甲基甲醇。Voges-Proskauer是双名以20世纪初的两位微生物学家命名^thCentury首次观察到合适的培养基经氢氧化钾处理后产生的红色反应。

后来发现，细菌代谢形成的培养基中的活性产物是乙酰甲基甲醇，丁二醇途径的产物。

VP测试原理

丙酮酸葡萄糖发酵降解的关键化合物，通过不同的代谢途径进一步代谢，这取决于不同细菌所拥有的酶系统。一个这样的途径产生乙酰乙酮(乙酰甲基甲醇)，一种中性反应的最终产物。

如果存在,乙酰甲基甲醇在α-萘酚、强碱(40% KOH)和大气氧的存在下转化为二乙酰基．在肉汤的蛋白胨中发现的双乙酰和含胍的化合物然后冷凝形成粉红色的聚合物。

生物体的成员，如Klebsiella-Enterobacter-Hafnia-Serratia集团生产乙偶姻作为葡萄糖代谢的主要最终产物，并形成少量的混合酸。

介质和试剂

1. 媒体:
   甲基红-Voges-Proskauer (MR/VP)肉汤(Clark和Lubs配制)用于Voges-Proskauer试验。MR/VP肉汤组成如下:原料MR/VP肉汤(g/L)多蛋白胨7 g葡萄糖5 g磷酸二钾5 g蒸馏水1 L终pH 6.9
2. 试剂:
   1. 5% α-萘酚(5 g/100 mL)在95%乙醇中。
      试剂应储存在4-8℃的暗处。保质期为2-3周。
   2. 40%氢氧化钾(KOH)
      将40克氢氧化钾颗粒溶解在聚乙烯瓶中，放入100毫升蒸馏水中。在准备过程中，将瓶子放在凉水浴中。

质量控制

使用前检查肉汤是否有污染、脱水和变质的迹象。在使用前对每一批新的培养基和试剂进行QC，其中一种生物表现出阳性反应，另一种生物表现出阴性反应。
生物

• 肺炎克雷伯菌ATCC 13883-VP阳性(红色)
• 大肠杆菌ATCC 25922-VP阴性(没有变化)

Voges Proskauer测试程序

1. 用测试生物体的纯培养物接种MR/VP肉汤管。
2. 在35°C孵育24小时
3. 在这段时间结束时，将1毫升肉汤倒入一个干净的试管中。
4. 加入0.6mL 5% α-萘酚*，然后加入0.2 mL 40% KOH。
   (注:试剂必须是按此顺序添加。)
5. 轻轻摇动试管**，使介质暴露在大气中的氧气中，并允许试管保持不受干扰10到15分钟。

* α-萘酚不是原始程序的一部分，但Barritt发现它是一种颜色增强剂，必须首先添加。

**摇动管子增加VP反应。

结果及解释

阳性的VP测试是粉红色:粉红色的发展在地表在加入试剂后15分钟或更长时间内。站立超过1小时后不应阅读测试，因为阴性沃氏培养可能产生类似铜的颜色，可能导致假阳性解释。

如果结果为阴性，则葡萄糖或MR/VP肉汤可孵育48小时，并重复试验。

报告结果

• 家庭的大多数成员肠杆菌科给出相反的MR和VP反应；然而，某些生物，比如h . alvei而且变形杆菌可能同时给予MR阳性反应和VP阳性反应(通常延迟)。
• 链球菌类群生物是VP阴性，而其他绿藻类群链球菌是VP阳性，除了前庭神经链球菌，即VP变量

Voges-Proskauer (VP)阳性生物肠杆菌科的家庭是:

1. 克雷伯氏菌物种
2. 肠杆菌属物种
3. 二氧化铪物种
4. 沙雷氏菌属物种

VP测试的局限性

1. 与延长潜伏期(>3天)，一些vp阳性生物可以在介质中产生酸性条件，产生微弱的阳性或假阴性VP反应。
2. 每2毫升培养基中添加的KOH不要超过2滴。过量的KOH会产生弱阳性反应，由于KOH单独与α-萘酚反应形成类似铜的颜色而被掩盖。
3. 在加入VP试剂1小时后不要读测试．可能出现类似铜的颜色，导致潜在的假阳性解释。
4. 试剂必须加入指定的顺序。顺序颠倒可能导致弱阳性或假阴性的VP结果。

参考文献和进一步阅读

1. 临床微生物程序手册，第四版。(2016)。在临床微生物程序手册，第四版．美国微生物学会。https://doi.org/10.1128/9781555818814
2. 诊断微生物学彩色图集与教材，科尼曼，第5版