乙酰胺(乙酰胺)是由醋酸衍生而来的最简单的酰胺。这种有机化合物的分子式是CH3.CONH2.
建议采用乙酰胺利用试验进行鉴别铜绿假单胞菌从其他非葡萄糖发酵,革兰氏阴性棒。它利用乙酰胺作为唯一的碳源来区分微生物。
目录
原则
乙酰胺肉汤/琼脂含有乙酰胺(CH3.CONH2)为唯一碳源,无机铵盐为唯一氮源。能够在这种培养基上生长的细菌产生这种酶acylamidase哪一个脱氨基乙酰胺释放氨。的氨的生产结果是碱度。pH值的变化使介质中的溴百里酚蓝指示物从绿色变成蓝色,使介质改变颜色从绿色到宝蓝色。
因此,介质蓝色的增长和随后的变化表明乙酰胺利用的阳性测试。乙酰胺的同化将导致黄色,不应被误认为是一个积极的结果。
材料与方法
成分 | 量(克/升) |
氯化钠 | 5.0克 |
Magenesium硫酸 | 0.2克 |
磷酸铵(NH4H2PO4),单碱的 | 1.0克 |
磷酸钾(K2HPO4),二 | 1.0克 |
乙酰胺 | 10.0克 |
琼脂 | 15.0克 |
溴麝香草酚蓝 | 0.08克 |
最终pH值:6.8 |
注意:乙酰胺肉汤可用于乙酰胺利用试验。
4.测试生物
- 产生荧光色素,不发酵葡萄糖,革兰氏阴性菌的孤立菌落,提示铜绿假单胞菌.
- 不寻常的非葡萄糖发酵,革兰氏阴性菌,作为鉴定的一部分。
质量控制
在使用前对每批新产品或介质进行质量控制。在使用或储存琼脂之前,检查琼脂是否有冻结、污染、裂纹、脱水和气泡的迹象。丢弃所有蓝色的管子。
- 乙酰胺积极:铜绿假单胞菌(ATCC 27853),增长;蓝色
- 乙酰胺-:大肠杆菌(ATCC 25922),无增长;绿色
方法
所需时间:4天。
- 从18-24小时培养的隔离良好的菌落中心挑选接种物。
不要从肉汤培养中接种,因为生长会太重,培养基的携带可能会导致假阳性反应。
- 用针在斜面上来回划痕接种乙酰胺。
不要刺斜,因为测试需要有氧环境。
- 将瓶盖松地盖在试管上。
- 在35°C至37°C有氧孵育至4天.
观察沿着斜面从绿色到蓝色的颜色变化。
- 如果模棱两可,重新培养为两个倾斜额外的天观察颜色的变化。
重复测试,结果不明确。
预期结果
- 正:生长在斜面上,斜面的颜色从绿色变为深蓝色
- 阴性:没有生长,没有颜色变化,斜面保持绿色。
Delftia (Comamonas)酸壳藻,铜绿假单胞菌,而且粪产碱杆菌属可进行乙酰胺脱氨。结合荧光色素,乙酰胺脱氨和阳性氧化酶测试结果足以识别铜绿假单胞菌。
限制
- 没有颜色变化的生长可能表明测试结果为阳性。如果进一步培养没有颜色变化,则重复较少接种量的试验。
- 阴性测试不排除鉴定铜绿假单胞菌,以及6%的荧光假单胞菌据报道,生物体会给出假阳性反应。其他荧光假单胞菌没有阳性反应。
参考文献和进一步阅读
- 贝利和斯科特的诊断微生物学,福布斯,第11版
- 安德里亚·j·林斯科特,2016年。临床微生物学程序手册,第四版。ASM出版社,华盛顿特区。doi: 10.1128 / 9781683670438。