硝酸盐还原试验:原理，程序，结果

硝酸盐还原试验是用来区分成员肠杆菌科基于它们产生硝酸还原酶的能力，这种酶可以将硝酸盐(NO3-)水解为亚硝酸盐(NO2-)，然后亚硝酸盐可能再次降解为各种氮产品，如氮氧化物、一氧化二氮和氨(NH)₃₎这取决于生物体的酶系统和它生长的环境。

硝酸盐还原试验的用途

1. 区分分枝杆菌物种．
2. 识别鱼类种类奈瑟氏菌属将它们从莫拉克斯氏菌属而且Kingella物种。硝酸盐还原试验是区分n球菌而且k . denitrificans，特别是当菌株k . denitrificans染色涂片显示为革兰氏阴性双球菌。
3. 促进物种鉴定棒状杆菌属。

原则

重接种量的试验生物在硝酸盐肉汤中培养。4小时孵育后，对肉汤进行硝酸盐(NO_3.^{- - - - - -})转化为亚硝酸盐(NO₂^{- - - - - -})，加入磺胺试剂和α-萘胺。

1. 如果生物体将硝酸盐还原为亚硝酸盐，培养基中的亚硝酸盐就会形成亚硝酸盐。加入磺胺酸后，会与亚硝酸反应生成重氮化磺胺酸．它与α-萘胺反应生成a红色的化合物．因此，如果加入硝酸盐试剂后，培养基呈红色，则认为是硝酸盐还原的阳性结果。
2. 如果培养基在加入试剂后没有变红，这可能意味着该生物无法还原硝酸盐，或者该生物能够反硝化硝酸盐或亚硝酸盐以产生氨或分子氮。因此，在测试中还需要另一个步骤．加入少量锌粉。如果管子在添加锌后变成红色，这意味着未还原的硝酸盐存在*。因此,第二步的红色是阴性结果。

*注意:锌的加入使硝酸盐还原为亚硝酸盐，亚硝酸盐在介质中形成亚硝酸盐，亚硝酸盐与磺胺酸反应。由此产生的重氮化磺胺酸与α-萘胺反应生成红色络合物。

如果添加锌粉后介质没有变红，则结果称为正完全。如果没有形成红色，就在那里没有硝酸盐可以还原吗．由于介质中也没有亚硝酸盐，这意味着发生了反硝化作用，形成了氨或分子氮。

要求:

1. 培养基:硝酸肉汤与倒置杜伦管
2. 试剂:硫酸试剂、萘胺试剂、锌粉
3. 其他:接种环，本生灯使滴下的东西,

过程

1. 使用无菌技术将大量生长的试验生物接种于硝酸盐肉汤中。
2. 在适当温度下孵育24至48小时
3. 向每个肉汤中加入一滴管磺胺酸和一滴管α-萘胺。
   1. 此时，颜色变为红色表示硝酸盐还原测试为阳性。如果你得到的是红色，那么你就可以停在这里了。
   2. 无颜色变化表明亚硝酸盐的缺失。这可能是因为硝酸盐没有被还原，也可能是因为硝酸盐被还原成亚硝酸盐，然后亚硝酸盐又被进一步还原成其他分子。如果你没有得到红色，那么你必须进行下一步。
4. 在每个肉汤中加入少量锌(一根牙签)。锌催化硝酸盐还原为亚硝酸盐。
   1. 此时，颜色变为红色表示硝酸盐还原测试为阴性，因为这意味着硝酸盐必须存在，并且必须被还原成亚硝酸盐。
   2. 没有颜色变化意味着没有硝酸盐。因此，在这一点上没有颜色变化是一个积极的结果。

结果及解释

1. 硝酸盐还原阳性:(红色的磺胺酸+ α -萘胺;锌后不变色)
2. 硝酸盐还原阴性:(没有颜色在磺胺+ α -萘胺之后，在锌之后是红色)

质量控制

1. 铜绿假单胞菌减少不_3(硝酸)到N_2(氮)．
2. 大肠杆菌减少不_3(硝酸)没有_{2(亚硝酸盐)}．