吡咯烷多基芳基酰胺酶(PYR)检测是一种快速检测方法，用于a组乙型溶血性链球菌和肠球菌的推定鉴定。PYR试验也用于鉴别大肠杆菌(-ve)，将其与其他吲哚阳性、乳糖阳性、革兰氏阴性棒分离。
PYR测试的基板是l-吡咯烷酮- β-萘酰胺(PYR)它被一种特定的细菌氨肽酶水解(吡咯烷酰肽酶)。底物被该酶水解后释放游离β-萘酰胺，可通过加入N, N-二甲氨基胍醛进行检测。该检测试剂与萘酰胺偶联形成红色希夫碱。
目录
过程
PYR测试有不同的格式。最初的PYR测试过去需要16-20个小时，但现在可以使用4小时的肉汤检测，这在这篇文章中进行了描述。其他形式包括快速(10-15分钟)测试，其中PYR试剂浸渍滤纸盘或条接种待测生物。
正(1,4和5):明亮的红-紫红色。负(2&3)黄色或弱橙色
肉汤试验
- 使用无菌细菌学循环，提取两到三个形态相似的菌落，并将其乳化在小体积的PYR肉汤中
- 在35°C下培养试管4小时。
- 加入一滴PYR试剂，观察颜色变化。
- 在加入试剂1分钟后应读取并记录反应。
PYR圆盘测试
- 用镊子将PYR盘放入培养皿中。
- 用无菌水湿润盘，但不要浸透。
- 用无菌棒从培养液中取出一到两圈血琼脂24到48小时前的盘子。对于需要48小时或更长时间生长的生物，可以使用几圈。
- 将菌落涂抹到PYR盘上。
- 允许反应2分钟(对于生长不良的生物体延长时间至10分钟)。
- 孵育期结束后，加入1滴肉桂醛试剂，观察是否呈红色。
结果及解释
- 阳性:在添加试剂的一分钟内就会出现深樱桃红色
- 阴性:没有颜色变化或黄色或橙色
质量控制
- 积极的控制:粪肠球菌,酿脓链球菌
- 消极的控制:链球菌agalactiae
注意:重要的是，在PYR测试之前进行测试，以确定该生物体是链球菌(即革兰氏阳性球菌，过氧化氢酶阴性)。其他生物(例如，某些空气球菌、葡萄球菌、营养变异链球菌、Arcanobacterium haemolyticum)也可能是PYR阳性。
限制:
- 如果椎间盘太潮湿，假阴性测试可能发生。
- 如果选择培养基或试管生化琼脂进行接种，可能出现假阴性的检测结果。
参考文献和进一步阅读
- 普罗科普，g.w.， &科尼曼，e.w.(2016)。科尼曼的彩色图集和诊断微生物学教科书(国际版第七版)。利平科特·威廉姆斯和威尔金斯。
- 安德里亚·j·林斯科特，2016，临床微生物学程序手册，第四版。ASM出版社，华盛顿特区。cmph.ch2.1 doi: 10.1128/9781683670438.
