血琼脂与溶血类型

血琼脂是丰富细菌生长媒介．挑剔的生物，如链球菌，不能在普通培养基上生长良好，但可以在血琼脂上生长。血琼脂是一种生长培养基trypticase大豆琼脂富含5%羊血的基础。

血液琼脂由含有蛋白质源(如色氨酸)的碱基、大豆消化蛋白、氯化钠(NaCl)、琼脂和5%的羊血。

血液中含有某些细菌的抑制剂，比如奈瑟氏菌属而且嗜血杆菌因此，血液琼脂必须被加热以使这些抑制剂失活，并释放必要的生长因子(例如，V因子)．加热血琼脂将其转化为巧克力琼脂(加热的血液会变成巧克力色)，并支持这些细菌的生长。

血液琼脂的组成

成分	克/升
比德心蛋白胨	10通用
胰蛋白示	10通用
氯化钠	5通用
琼脂	15通用
羊血	5%
最终pH值为25°C 7.3±0.2

蛋白质来源可能因制造商而异，可能是酪蛋白的胰腺消化，豆粕的木瓜消化，中和蛋白胨，酵母提取物，或它们的组合。请检查所购介质中的插入纸。

血液的选择

羊血是制备血琼脂板的首选，其次是马血、兔血或山羊血。

不应使用人血，特别是过期的柠檬酸供血，因为这可能含有抑制某些病原体生长的物质。宿主血液中残留的抗生素和ASO或抗m蛋白等抗体会干扰菌的生长链球菌．柠檬酸抑制乙型溶血性链球菌的生长。受感染的人血也可能含有感染原。

血液琼脂的制备

脱水血琼脂制备血琼脂的研究

1. 按照制造商的指示准备血液琼脂基底。
2. 121°C高压灭菌15分钟。
3. 将这样制备的血液琼脂基底转移到50°C的水浴中。
4. 当琼脂底冷却至50°C时，加入无菌羊血，轻轻混合均匀。避免气泡的形成。你必须在给药的时候把血液加热到室温熔融琼脂基地。
5. 将15毫升无菌培养皿中
6. 在培养基上标上制备日期，并给出批号(如有必要)。
7. 保存在2-8°C，最好是密封的塑料袋，以防止水分流失。这样制备的血琼脂保质期可达四周。

注意:如果你打算准备一批血琼脂板，先准备少量血琼脂板，以确保血液是无菌的。

血液琼脂的质量控制

1. 血琼脂在室温下的pH值为7.2 ~ 7.6。
2. 将培养皿接种5小时的肉汤培养酿脓链球菌而且肺炎链球菌。也用接种板接种流感嗜血杆菌和条纹金黄色葡萄球菌(即Satellitism测试）．
3. 在35-37°C富含二氧化碳的环境中孵育过夜。
4. 检查每个品种的生长特征
   1. 链球菌: Beta-hemolysis
   2. 肺炎链球菌: Alpha-hemolysis
   3. Satellitism的流感嗜血杆菌

血液琼脂的用途

血琼脂有两个主要用途:

1. 隔离，识别(使用任何一种奥普托欣盘或杆菌肽片并测试分离物的敏感性)，以及链球菌的抗菌敏感性。
2. 如果有溶血，确定溶血类型。

溶血

某些细菌产生细胞外酶，在血琼脂中溶解红细胞(溶血)。这些溶血素(外毒素)从菌落向外放射状扩散，导致培养基中红细胞(RBC)的完全或部分破坏，细胞内血红蛋白完全变性为无色产物。

羊血琼脂产生四种溶血类型，即;α(α）溶血，beta (β）溶血，γ (γ）溶血，和α α或宽区α溶血。

观察溶血最好的方法是检查在厌氧条件下生长的菌落或检查地下菌落。要知道溶血的类型，血液琼脂板必须是将光举到光源前，观察从后面射来的光(透射光)。

如果有任何一种溶血是存在的，那么一个人会观察到一个溶血区围绕着一个不断增长的殖民地。

α(α）溶血

α溶血是红细胞的部分裂解，在菌落周围产生绿灰色或棕色的变色。溶血是由于红细胞血红蛋白降低为高铁血红蛋白在蚁群周围的介质中。许多α -溶血性链球菌是人类正常菌群的一部分，但是链球菌引起的肺炎e这也是阿尔法溶血引起严重的肺炎和其他致命的传染病。

绿藻链球菌群也会导致溶血。

β(β）溶血

β -溶血是红细胞的完全溶解，产生明显、清晰、
菌落周围和下方的无色区域。红细胞膜被破坏。A组-溶血性链球菌的微生物酿脓链球菌B组，beta-hemolytic链球菌- - - - - -链球菌agalactiacebeta-hemolytic。A组链球菌的溶血素(不稳定氧(SLO)和氧稳定(SLS)溶血素)的最大活性仅在厌氧条件下观察到，因此在增加CO2浓度的培养皿中更好地观察到β -溶血菌落。

其他β -溶血生物是金黄色葡萄球菌，单核细胞增多性李斯特氏菌,蜡样芽胞杆菌。

γ(γ）或non-hemolysis

-溶血表明没有红细胞溶血。菌落下面和周围的介质没有变化。

阿尔法溶血或广谱阿尔法溶血

完整红细胞区与菌落相邻的一小块完整红细胞区，在完整红细胞区周围有一个完整的红细胞溶血区这种类型的溶血可能与β-溶血相混淆。

目标溶血

perfringens梭状芽胞杆菌在实验室很容易通过其特有的“双区”溶血也被称为目标溶血．