明胶是一种来自动物蛋白胶原的蛋白质，胶原是脊椎动物结缔组织的组成部分。长期以来，它一直被用作食品中的固化剂。产生蛋白水解酶和明胶酶的生物，将明胶水解成多肽和单个氨基酸。在这个过程中，明胶失去了它的结构，变成了液体。
明胶水解试验原理
明胶水解试验用于检测生物体产生液化明胶的明胶酶的能力。这个过程发生在两个连续的反应中。在第一个反应中，明胶酶将明胶降解为多肽。然后，多肽进一步转化为氨基酸。然后细菌细胞可以吸收这些氨基酸并在代谢过程中使用它们。
质量控制
- 在储存和使用前，在冷藏温度下检查明胶琼脂管是否有污染、脱水和缺乏液化。
- 每批新介质在使用前都要进行QC。
- 每次使用时使用未接种对照。
- 生物
- 铜绿假单胞菌ATCC 10145 -液化(阳性)
- 大肠杆菌ATCC 25922 -无液化(无)
明胶水解试验程序
有几种测定明胶酶产量的方法，都是利用明胶作为底物。标准的和最常用的方法是营养明胶刺法。
- 在含有营养明胶培养基的试管上刺4-5次(半英寸)，接种大量的试验细菌(18- 24小时)。
- 将接种管与未接种的培养基一起在35°C或在测试细菌的最佳生长温度下孵育48小时。
- 每天从培养箱中轻轻取出试管，将其放入冰浴或冰箱(4°C)中30分钟或直到控制试管凝固。
(明胶通常在28°C以上液化，因此为了确认液化是由于明胶酶的活性，管子浸泡在冰浴中或在4°C的冰箱中保存)。 - 冷藏30分钟后，将试管轻轻倾斜，观察测试生物的液化情况。
- 如果由生物体的性质指示，将阴性测试孵育2周，并定期检查。
预期结果
管下:负
积极的:接种管部分或全部液化(未接种的控制介质必须完全凝固)，即使暴露在冰浴或冰箱的低温下(4℃)。
负:接种管即使暴露在冰浴或冰箱的低温(4℃)下也能完全凝固
对营养明胶进行了常见细菌及其对明胶水解的反应试验。
| 物种 | 增长 | 液化 |
| 枯草芽孢杆菌 | + | + |
| perfringens梭状芽胞杆菌 | + | + |
| 大肠杆菌 | + | - - - - - - |
| 变形杆菌属寻常的 | + | + |
| 沙雷氏菌属liquefaciens | + | + |
| 金黄色葡萄球菌 | + | + |
明胶水解试验用途
明胶酶的产生在革兰氏阴性棒和革兰氏阳性棒的分类和鉴定中都是有用的分类辅助。
- 明胶液化试验也可用于明胶酶产菌属的鉴别沙雷氏菌属而且普罗透斯来自其他家庭成员肠杆菌科．
- 普罗透斯种虫害和沙雷氏菌属sp通常为明胶酶阳性。
- 明胶水解试验有助于鉴别和鉴别芽孢杆菌、梭状芽孢杆菌和假单胞菌．
- 革兰氏阳性,孢子形成的，杆状，好氧或厌氧细菌，如炭疽杆菌，蜡样芽胞杆菌，枯草芽孢杆菌，perfringens梭状芽胞杆菌,有毒物质造成梭状芽胞杆菌,明胶水解也呈阳性。
- p .荧光明胶酶是阳性的，但是p . putida明胶酶阴性。
- 区分明胶酶阳性、致病性金黄色葡萄球菌明胶酶阴性，无致病性美国epidermidis．
限制
- 明胶酶通常在管状培养基表面起作用。在试管还温的时候摇晃它可能会导致假阴性的解释。
- 明胶的凝胶能力可能不同;因此，用该试验培养未接种对照。读数前，对照品必须与测试品一起冷藏。
参考文献和进一步阅读
- 贝利和斯科特的诊断微生物学，福布斯，第11版
- 科尼曼的彩色图集和诊断微生物学教科书
- 临床微生物程序手册，第四版。(2016)。在临床微生物程序手册，第四版．美国微生物学会。https://doi.org/10.1128/9781555818814
