利用克利格勒铁琼脂(kigler’s Iron Agar, KIA)进行碳水化合物发酵的检测。KIA反应有助于在家族中包括/排除特定的细菌分离物肠杆菌科．如果一个生物体不能发酵葡萄糖，那么在KIA中，观察到碱性倾斜-碱性对角(无变化)反应，仅这一反应就足以从肠杆菌科中排除一个分离物。KIA也用于对的推定识别沙门氏菌志贺氏杆菌和其他成员肠杆菌科家庭。
KIA的组成与三糖铁琼脂(TSI)除了TSI中添加了10克蔗糖。
克利格勒铁琼脂的组成
克利格勒铁琼脂的主要成分是蛋白胨、实验室lemco粉、酵母提取物、氯化钠、乳糖、葡萄糖(葡萄糖)、柠檬酸铁、硫代硫酸钠、酚红和琼脂。
| 成分 | 克/升 |
| 牛肉膏 | 3转基因 |
| 酵母提取物 | 3转基因 |
| 蛋白胨 | 15通用 |
| 眎蛋白胨 | 5通用 |
| 乳糖 | 10通用 |
| 葡萄糖 | 1转基因 |
| 硫酸亚铁 | 0.2通用 |
| 氯化钠 | 5通用 |
| 硫代硫酸钠 | 0.3通用 |
| 琼脂 | 12个通用 |
| 酚红 | 0.024通用 |
| 蒸馏水等于1l | |
| 最终pH值:7.4 |
牛肉提取物、酵母提取物、蛋白胨和蛋白蛋白胨四种蛋白质衍生物的结合，使KIA营养丰富。由于缺乏抑制剂，除了最挑剔的细菌种类(专性厌氧菌除外)外，所有细菌都能生长。
葡萄糖和乳糖是碳水化合物的来源，并且均匀地分布在管子的倾斜和臀部(深层)部分。然而，乳糖的浓度是葡萄糖的10倍。与TSI不同，KIA中不含蔗糖。硫代硫酸钠是硫的来源，硫酸亚铁是硫化氢探测器。
pH值低于6.8时，苯酚红色指示剂呈黄色。由于未接种培养基的pH值缓冲在7.4，相对少量的酸产生导致可见的颜色变化。
KIA的准备工作
克利格勒铁琼脂(KIA)最好由现成的脱水粉末制备，可从商业培养基供应商处获得。通常使用的培养基浓度为每100毫升蒸馏水5.5克(浓度可能因制造商而异)。
- 按照制造商的指示准备介质。冷却至50-55°C时，充分混合并在大尺寸管中分配6毫升(约。16 - 160毫米)。
- 用高压灭菌法消毒(盖上盖子)在121°C下放置15分钟。
- 让熔化的琼脂在倾斜的位置凝固。这导致在同一管中有两个反应室。
- 的偏部分:它的整个表面暴露在大气中的氧气中，是需氧的。
- 的臀部或臀部部分:它不受空气的影响，是相对厌氧的。
- 标明培养基的日期，并给它一个批号，储存在阴凉黑暗的地方或2-8°C。
注意:重要的是，在准备介质时，对接应该比斜坡长或至少相等，每个大约3厘米，以保持这种两腔效应。
保质期:大约3周或更长时间，条件是管盖拧紧，介质外观没有变化表明污染、变质或pH值改变。
培养基pH值:这应该在室温下pH值7.2- 7.6的范围内。
KIA接种
用一根直线接种KIA培养基，首先刺穿臀部，然后在斜坡上划出锯齿形。接种后，确保管顶是松的。
原则
Non-Lactose发酵罐
如果KIA管接种了不能利用乳糖的葡萄糖发酵生物，只有相对少量的酸从培养基中0.1%浓度的葡萄糖发酵获得。
最初，在孵育的前8至12小时内，即使是这个量的酸也足以将深色和斜色都转化为黄色。
然而，在接下来的几个小时内，葡萄糖供应完全耗尽，细菌开始氧化降解管中氧气存在的倾斜部分中的氨基酸。这导致胺的释放，很快抵消了存在于倾斜中的少量酸;18至24小时后，整个斜度恢复为碱性pH值，颜色恢复为红色。
然而，在试管的深层(厌氧部分)，氨基酸降解不足以抵消形成的酸，介质保持黄色。
因此，KIA上的碱-斜-酸-对接反应是被试生物是非乳糖发酵剂的重要标志。
乳糖发酵罐
如果KIA管接种了乳糖发酵生物，那么，即使葡萄糖在最初的8到12小时后完全耗尽，发酵仍在继续，因为生物能够使用乳糖(存在于葡萄糖浓度的10倍)。
因此，在18至24小时结束时检查试管时，乳糖发酵产生的酸仍在发生，斜面和深面都呈黄色，导致酸-斜-酸-深反应。
结果
在KIA上生长的细菌通常会产生三种反应。
- 介质没有变化，即。碱性斜面/碱性对接(K/K):无碳水化合物发酵。存在非发酵性革兰氏阴性杆菌(不能通过葡萄糖或乳糖发酵产生酸的生物)如。铜绿假单胞菌。
- 非乳糖发酵剂，即。碱性斜面/酸性对接(K/A):葡萄糖是发酵的，但乳糖不是。这是非乳糖发酵细菌的特征，例如志贺氏杆菌物种。最初，非乳糖发酵罐通过葡萄糖发酵使培养基的深层和斜面酸化，但斜面恢复到碱性pH，因为碱性胺是由表面附近多肽(来自培养基中的蛋白质)的氧化脱羧形成的。
- 乳糖发酵罐酸斜/酸对接(A/A):由乳糖发酵细菌使管子的深层和斜面完全永久酸化。葡萄糖和乳糖都是发酵的。这是乳糖发酵大肠菌群的特征，例如大肠杆菌和Klebsiella-Enterobacter物种。
天然气产量:试管底部的空间和试管中间琼脂的分裂表示气体(CO)2)由有机体产生。
硫化氢生产:黑色深(对接)表示硫化氢(H2S)的产生。有时候屁股部分会完全是黑色的。在这种情况下，假定管的尾部部分是酸性的(黄色由于H2年代生产)。非乳糖发酵，产生硫化氢的细菌，例如沙门氏菌物种,枸橼酸杆菌属物种,普罗透斯种产碱性斜/酸性(黑色)屁股。
A: Acid/酸，气体;B: Acid/酸性，无气体;C:碱/酸;D:碱性/酸性，H2S+;艾凡:碱性/碱性
生物及其在KIA中的反应
| 生物名称 | 反应 (红色= Alk，黄色= Acid) |
气体 | H2年代 |
| 铜绿假单胞菌 | 碱/碱 | - - - - - - | - - - - - - |
| 大肠杆菌 广告组 |
酸/酸 碱/酸 |
+ + |
- - - - - - - - - - - - |
| 志贺氏杆菌物种(痢疾链球菌、弗氏链球菌、博伊氏链球菌和索内链球菌) | 碱/酸 | - - - - - - | - - - - - - |
| 沙门氏菌甲型副伤寒 | 碱/酸 | - - - - - - | + |
| 沙门氏菌乙型副伤寒 | 碱/酸 | + | + |
| 沙门氏菌甲型副伤寒C | 碱/酸 | + | + |
| 沙门氏菌伤寒 | 碱/酸 | + | - - - - - - |
| 其他沙门氏菌型 | 碱/酸 | +(弱) | d |
| 克雷伯氏菌肺炎 | 酸/酸 | ++ | - - - - - - |
| 克雷伯氏菌oxytoca | 酸/酸 | ++ | - - - - - - |
| 克雷伯氏菌(原肠杆菌属）aerogenes | 酸/酸 | ++ | - - - - - - |
| 肠杆菌属下水道 | 酸/酸 | ++ | - - - - - - |
| 枸橼酸杆菌属freundii | Acid/酸或Alk/酸 | + | + |
| Serriatia mercescens | 碱/酸 | + | - - - - - - |
| 变形杆菌属寻常的 | 碱/酸 | +/- | + |
| 变形杆菌 | 碱/酸 | + | + |
| 摩根氏菌属morganii | 碱/酸 | + | - - - - - - |
| 鼠疫enterocolitica | 碱/酸 | - - - - - - | - - - - - - |
碱性:碱性;+ 90%以上菌株为阳性;- 90%或以上菌株为阴性;++强烈的正面反应;D:不同的菌株有不同的效果。
自霍乱弧菌发酵葡萄糖和蔗糖，在克利格勒铁琼脂上观察到碱斜/酸深反应，但在三糖铁琼脂(TSI)上观察到酸斜/酸臀反应。气体不是形成的
H2不生成S。
*自霍乱弧菌发酵葡萄糖和蔗糖，在克利格勒铁琼脂上观察到碱性倾斜/酸性深度反应，但在三糖铁琼脂(TSI)上观察到酸性倾斜/酸性深度反应。
参考资料及进一步阅读
- 诊断微生物学彩色图集和教材，科尼曼，第五版
- 贝利和斯科特的诊断微生物学，福布斯，第11版
- 热带国家地区实验室实践第2部分。莫妮卡·奇斯堡，第二版
