石蕊乳汁试验:原理、程序和结果

石蕊乳是一种未定义的以牛奶为基础的培养基，由脱脂牛奶和pH值指示剂azolitmin(石蕊)组成。唑胺在pH值4.5时呈粉红色，在pH值8.3时呈蓝色。介于这两个极端之间的是紫色。石蕊除了是pH值指示剂外，还是Eh(氧化还原)指示剂。还原石蕊为白色，氧化石蕊为紫色。

石蕊乳培养基根据微生物代谢石蕊乳的能力来区分微生物。石蕊乳中的四个基本反应是;乳糖发酵，石蕊还原，酪蛋白凝固，酪蛋白水解。这些反应的组合会产生不同的结果，每一种都可以用来区分细菌。

石蕊乳汁主要用来区分属内的成员梭状芽胞杆菌，它也能求导肠杆菌科从其他革兰氏阴性杆菌。石蕊乳汁还能培养和维持乳酸菌的培养。

原则

石蕊乳汁试验测定生物体代谢石蕊乳汁的能力。石蕊乳中有四种基本反应:乳糖发酵、石蕊还原、酪蛋白凝固、酪蛋白水解。

1. 乳糖发酵:乳糖发酵实验当石蕊变成粉红色由于酸的产生。如果产生了足够的酸，牛奶中的酪蛋白就会沉淀并形成酸凝块。酸凝块使介质凝固根据石蕊的氧化还原状态，可呈现粉红色或白色，顶部有粉红色带。酸性凝块可以在碱性条件下溶解。凝块中的裂缝或裂缝是产生气体的证据。分解凝块的重气体产生称为风暴发酵。石蕊乳的暴风雨发酵是其特点perfringens梭状芽胞杆菌。
2. 石蕊还原:一些微生物还原石蕊。如果石蕊在乳糖发酵过程中发生还原，则在下管部分培养基变白，还原速率越大。
3. 酪蛋白凝固:一些细菌产生蛋白水解酶(酪蛋白酶)，如肾素、胃蛋白酶或凝乳蛋白酶，使酪蛋白凝固并形成凝乳。凝块不同于酸性凝块，因为它在碱性条件下不会溶解。在某些生物体的作用下，凝乳会收缩，形成一种稻草色的液体，叫做乳清在表面。
4. 酪蛋白水解:一些细菌会产生酪蛋白蛋白酶，使牛奶变成稻草色，类似于浑浊的血清。只能部分消化酪蛋白的细菌会产生氨(NH3)，这会提高培养基的pH值，使石蕊变成蓝色。在透明液体顶部形成蓝色或紫色环或整个介质变蓝表明发生碱性反应。

媒体:

脱脂牛奶提供生长所需的营养物质、发酵所需的乳糖和酪蛋白形式的蛋白质。

成分	量(克/升)
脱脂奶粉	100克
石蕊	0.5克
亚硫酸钠	0.5克
培养基pH值:6.8

质量控制

• 发酵:perfringens梭状芽胞杆菌(ATCC13124):产气
• 酸:嗜酸乳杆菌(ATCC11506):血栓形成
• 胨化:铜绿假单胞菌(ATCC27853):清算

过程

石蕊乳的结果和解释

石蕊指示剂的出现

颜色	解释	生物
粉红色或淡紫色	酸反应(一个）	大肠杆菌
蓝色中号或顶部的蓝色带	碱性反应(K)	粪产碱杆菌属/铜绿假单胞菌
紫色(与未接种对照组相同)	没有变化(NC)
白色(介质的下部)	石蕊还原(R)。记录为脱色

牛奶的外观

牛奶的稠度	解释	生物
凝血或血块	血栓的形成
半固体的，非粉红色的;顶部有清晰的灰色流体	凝乳(C)
粉红色和实心(如果石蕊减少，则下部为白色);凝块不可移动	酸凝块(交流)	乳酸菌lactis
血块有裂缝	气体(G)	acetobutylicum梭状芽胞杆菌
血块被分解	暴风雨的发酵(年代)
血块溶解，呈透明、灰白色、水样液体，呈收缩、不溶的粉红色血块。	蛋白胨消化D(酸反应)	sporogenes梭状芽胞杆菌
溶出的血块呈灰色，水状液体，呈透明的，收缩的，不溶的蓝色血块	胨化*P(碱性反应)

*胨化:胃蛋白酶作用:蛋白质在胃蛋白酶的作用下转变为蛋白胨

限制

石蕊培养基反应不具有特异性，应后续进行额外的微生物鉴定试验。

参考文献和进一步阅读

1. 贝利和斯科特的诊断微生物学，福布斯，第11版
2. 勒波菲MJ和皮尔斯BE。微生物实验室摄影图集，第5版(2021年)。莫顿出版公司。