XLD琼脂:组成、原理、结果和用途

木糖赖氨酸脱氧胆酸(XLD)琼脂是革兰氏阴性肠道微生物分离、培养和分化的选择性分化培养基。这种培养基主要从临床和非临床标本中分离和区分沙门氏菌和志贺氏菌。

图:大肠杆菌和沙门氏菌在XLD琼脂中混合培养
图:混合文化大肠杆菌而且沙门氏菌XLD琼脂

XLD琼脂选择性地促进沙门氏菌而且志贺氏杆菌通过抑制其他肠道病原体,并根据木糖发酵、赖氨酸脱羧和硫代硫酸钠产生硫化氢来区分革兰氏阴性肠道细菌。

采用Taylor配制XLD培养基,用于肠道病原体的分离和分化。

XLD的组成琼脂

XLD琼脂的关键成分有三种(木糖,乳糖,和蔗糖赖氨酸和柠檬酸铁铵。

酵母提取物提供生物生长所需的氮、碳和维生素的来源。培养基中的脱氧胆酸钠抑制革兰氏阳性菌的生长。氯化钠能维持渗透平衡琼脂是固化剂

每升配方成分:

成分 量(克/升)
乳糖 7.5通用
蔗糖 7.5通用
硫代硫酸钠 6.8通用
赖氨酸 5.0通用
氯化钠 5.0通用
木糖 3.75通用
酵母提取物 3.0通用
钠脱氧胆酸盐 2.5通用
柠檬酸铁铵 0.8通用
酚红 0.08通用
琼脂 15.0通用

XLD原理琼脂

木糖被大多数革兰氏阴性肠道细菌迅速发酵,包括沙门氏菌.这导致介质酸化,使酚红指示黄.自志贺氏杆菌SPP不使用木糖,不会发生酸化,而且红色菌落产生了.这个性质有助于区分志贺氏杆菌spp。

木糖供应耗尽后,沙门氏菌SPP脱羧赖氨酸,增加pH值至碱性条件,也产生红色菌落样志贺氏杆菌然而,沙门氏菌也代谢硫代硫酸盐产生硫化氢,这导致形成具有黑色中心的菌落并能将它们与颜色相似的区分开来志贺氏杆菌殖民地。

发酵乳糖、蔗糖和木糖,但赖氨酸脱羧酶阴性的生物会导致酸性pH值并产生黄色菌落。

培养基制备

  1. 将55克培养基悬浮在一升纯净水中。
  2. 不断搅拌加热,直至介质达到沸点。
  3. 避免过热。不要高压灭菌。
  4. 立即转移到50°C的水浴中。
  5. 冷却后倒入无菌培养皿中。

建议不要制备需要长时间加热的大体积,从而产生沉淀物。

结果解释

在培养皿与试验生物孵育后,形成各种颜色的菌落,并以此为基础进行分化。

XLD琼脂的菌落特征 反应基础 可能的病原体
红色的殖民地 碱性反应,木糖/乳糖/蔗糖不发酵或木糖发酵后赖氨酸脱羧 志贺氏杆菌spp,Providenciaspp,假单胞菌spp, H2S非生成物沙门氏菌仕达屋优先计划
红色的殖民地和黑色的中心 木糖阳性,赖氨酸脱羧酶阳性,能产生H2S,在碱性pH下呈黑色中心菌落 硫化氢生产沙门氏菌伤寒沙门氏菌
黄色不透明菌落 发酵木糖而不是乳糖和蔗糖,赖氨酸阴性,给出酸性pH值 大肠杆菌、克雷伯氏菌/柠檬酸肠杆菌、沙雷菌和变形杆菌仕达屋优先计划
黄色的殖民地 乳糖或蔗糖发酵,赖氨酸为阴性,酸碱度为酸性 可能的大肠菌群蔗糖阳性变形杆菌

质量控制

XLD培养:左:红粉黑色中心的鼠伤寒沙门氏菌菌落右:红粉志贺菌菌落
XLD文化:
左图:红粉色黑色中心的鼠伤寒沙门菌菌落
右图:红粉色志贺菌菌落

市售脱水培养基应均匀,自由流动,颜色为浅粉米色。制备后,培养基为鲜红色至红橙色,pH值略呈中性(7.20-7.60)。

制备的培养基板的质量检测应通过无菌和性能测试来完成。

  1. 不育性测试:未接种的XLD琼脂板在35-37°C孵育48小时,观察是否有生长。48小时后,无菌测试板应保持透明。如果发现菌落,全部丢弃。
  2. 性能测试:将已知标准菌株接种于XLD琼脂板上,35-37℃孵育18- 24小时,观察其生长和菌落特征。
生物 生长和菌落形态
S.typhimurium写明ATCC 14028 生长良好,红色菌落,中心为黑色
S.flexneri写明ATCC 12022 繁茂的生长,红色的殖民地
大肠杆菌写明ATCC 25922 部分抑制,大,平,黄色菌落
粪肠球菌写明ATCC 29212 部分抑制至完全抑制,菌落清晰

XLD琼脂的使用

  1. 用于分离和鉴别沙门氏菌而且志贺氏杆菌来自其他肠道病原体的SPP。
  2. 分离和筛选含有怀疑含有肠道病原体的混合菌群的样品,例如医疗标本或食品。
  3. 检测沙门氏菌非无菌药品(符合EP、USP)及食品、水乳制品等。
木糖赖氨酸脱氧胆酸(XLD)培养。
木糖赖氨酸脱氧胆酸(XLD)培养。
左:黄色大肠杆菌右:红粉色沙门氏菌殖民地(一些普罗透斯物种看起来一模一样)

限制

  • 单一培养基可能不足以恢复所有病原体,因此也应使用选择性较低的培养基,如麦康基琼脂。
  • 非肠道病原体如假单胞菌可能生长在培养基中产生红色菌落,如志贺氏菌;因此,进一步,识别是必要的。
  • 变形杆菌可能会产生类似于沙门氏菌但可以与沙门氏菌菌落区分开来,后者很大,有一个大的黑色中心。
  • 长时间的潜伏期(超过48小时)可能导致假阳性结果。
  • 副伤寒沙门氏菌、Choleraesius沙门氏菌、pullorum沙门氏菌和s.g inarum沙门氏菌产生红色菌落,没有黑色中心,因此可能看起来像志贺氏杆菌。
  • 由于它是一种选择性培养基,在进行生化试验、血清分型等之前,进一步传代到基础培养基上是必要的。188金宝搏官网下载app

参考文献

尼莎Rijal

我在尼泊尔国家公共卫生实验室(NPHL)担任微生物学家,这是尼泊尔卫生服务部(DoHS)下属的政府国家参考实验室。我工作的关键领域是细菌学,特别是抗菌素耐药性。

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