Quellung反应:原理，程序，结果

Quellung(或Neufeld)反应是血清分型的金标准技术肺炎链球菌(肺炎球菌)．这种显微“沉淀素试验”可用于鉴别肺炎球菌或确定荚膜血清型单独的肺炎球菌分离物。

有超过90种不同的荚膜血清型肺炎链球菌．该技术利用高质量的显微镜和特定的肺炎球菌抗血清(商业上可获得的混合、组或血清型特异性抗血清)，通常用于世界各地的参考和研究实验室。

Quellung反应(囊体肿胀)进行起来相当简单，只要有合适的显微镜和抗血清，就可以应用。

该方法包括测试肺炎球菌细胞悬液与汇集和特定的抗血清针对荚膜多糖．在显微镜下观察抗原-抗体反应。阳性的quellung反应是肺炎球菌荚膜多糖与分型抗血清中所含的类型特异性抗体结合的结果。

协议中有三个主要步骤:

1. 制备一种细菌细胞悬液，
2. 将细胞和抗血清混合在玻片上，然后
   用显微镜观察Quellung反应

建议先用混合抗血清连续试验，直到观察到阳性反应。然后，分型应该通过测试个体组和血清型特异性抗血清进行，包括在抗血清池中，给予阳性反应，以确定血清组和血清型。

一些菌株流感嗜血杆菌生产一种多糖胶囊，通过胶囊污渍以及与类型特异性抗血清的Quellung反应。

原则

血清中存在的抗囊抗体与肺炎球菌囊的碳水化合物物质发生反应，在囊表面引起微沉淀素反应肺炎链球菌。这种抗原-抗体反应导致囊的折射率发生变化，使囊看起来“肿胀”，更明显。

在加入反染剂(亚甲基蓝)后，肺炎球菌细胞染成深蓝色，并被一圈界限分明的晕包围，这是囊的外缘。通过胶囊传输的光看起来比肺炎球菌细胞或背景更亮。单细胞、细胞对、细胞链、甚至细胞团都可能有阳性的镇静反应。

平息反应的程序

a .细菌细胞悬液的制备

1. 培养分离物在培养基上进行18-24小时的测试血琼脂板(BAP)在35-37°C和~5%的二氧化碳(或在一个蜡烛瓶)。
2. 从BAP上的一夜生长，使用无菌循环准备轻度到中度的细胞悬液(大约等于a5麦克法兰密度标准)加入0.5毫升0.85%生理盐水。
   • 在1000倍放大的显微镜下，当有25-50个细胞时，可以观察到最佳的平息反应。

B.在玻片上混合细胞和抗血清

1. 将等量的抗血清(5µl)和亚甲蓝(5µl)涂在显微镜载玻片上。
2. 加入约0.2-1.0 μ l的稀释细胞悬浮液，用移液管尖端将三者混合。
3. 用22平方毫米的盖片覆盖悬浮液，在室温(25°C)下孵育10-15分钟。
   1. 不要让载玻片上的液体变干。

C.用显微镜阅读Quellung反应

1. 使用油浸镜在1000X下检查幻灯片。
2. 开始使用混合的抗血清进行测试。一旦得到阳性反应，继续使用给予阳性反应的聚合抗血清中包含的个体组和血清型特异性抗血清来确定血清组和血清型。

结果

• 一个积极的观察Quellung反应时蒴果呈明显的晕状围绕着染成深蓝色的细胞
• 一个负存在时观察到镇静反应没有清晰、放大的光晕染色细胞周围。

视频(来源:Habib et al The University of Melbourne):
(本视频中提到的程序与文本中描述的略有不同)

故障排除

1. 在某些情况下，观察积极的反应可能很困难。在制备细胞悬液的同一天准备和阅读所有的平息反应。
2. 当读取反应时，寻找自由漂浮的单个或成对的细胞。
3. 凝集(细胞聚集在一起)不是一个积极的平息反应。
4. 如果在任何抗血清池中未观察到平息反应，则该菌株可能不可分型，但该菌株的鉴定为肺炎链球菌应由奥普托欣易感性而且胆汁溶解度测试．

质量控制

接受的每批抗血清均应使用喹仑反应进行阳性检测肺炎链球菌已知荚膜血清型的参考菌株。

奎隆反应的意义:

• 它是了解肺炎球菌流行病学的工具，即流行病学监测。
• 胶囊血清分型可为疫苗疗效和影响研究提供有用信息