运动测试是用来确定一个生物体是运动的还是不运动的。活动生物含有鞭毛,可以帮助它们传播到接种点以外。运动细菌一般是杆菌,但也有少数运动球菌存在。活动细菌通过一种叫做鞭毛(少数特殊的细菌借助轴丝移动,在显微镜下是看不到的)。运动性试验有助于我们区分细菌属和种。
原则
有很多种方法来确定细菌的运动性;188金宝搏官网下载app生化测试和显微分析。如果有新鲜的细菌培养物,显微镜是确定细菌活力的最准确的方法”吊滴法”是一种常用的显微技术。对于湿法制备,将肉汤中的一滴生物体悬浮在干净的玻片上,添加盖片,并在显微镜下观察培养的运动性。
偶尔将该生物接种在半固态运动介质中,沿一条直线向下穿过管的中心,然后进行培养。运动生物从接种线向外迁移时,会引起整个试管的浑浊,而非运动生物只会沿着接种线生长。在半固体琼脂培养基中,活动细菌“聚集”并进行扩散生长,肉眼很容易识别。
质量控制
使用标准细菌分离物测试每种新制备或购买的运动性试验介质的无菌性和性能。
有机体和ATCC编号。 | 能动性 | 吲哚 | 硫化氢 |
大肠杆菌25922 | + | + | - - - - - - |
肺炎克雷伯菌13883/27736 | - - - - - - | - - - - - - | - - - - - - |
变形杆菌属寻常的33420 | + | + | + |
过程
- 在试管中准备半固态琼脂培养基。硫化物吲哚动力(SIM)介质或动力试验介质可加或不加TTC(三苯四唑氯化铵)或硝酸动力介质。
- 用一根直的金属丝接种,从管子的中心往下扎一刀,大约是培养基深度的一半。
- 在有利于运动的条件下孵化。
- 37°C孵育
- 每隔一段时间检查一次,例如6小时后、1天和2天(视乎细菌产生时间而定)。新制备的含1%葡萄糖的培养基可用于厌氧菌的运动试验。
结果
拿着管子对着灯,观察刺线以确定活动性。
- Non-motile细菌通常生长局限于刺状线,边缘清晰,周围介质清晰透明。
- 能动的细菌通常给予弥漫,朦胧的生长,蔓延整个媒体渲染它略微不透明。
报告结果
- 非发酵菌,革兰氏阴性菌,还有肠杆菌科它们的动力不同。
- 芽孢杆菌spp.应该是灵活的。缺乏活力可能是炭疽芽孢杆菌。
- 肠球菌casseliflavus而且肠球菌gallinarum是运动型的。
- 李斯特菌在25°C时可活动,在管的顶部有典型的伞状生长。在潮湿的坐骑上,它们表现出翻滚运动。他们是在35°C时不活动。
- 鼠疫enterocolitica在25°C时可以活动,但在35°C时不行。
- 不动杆菌是不动的。
使用年代
在实验室中,使用半固体介质的运动性试验通常用于鉴别革兰氏阴性细菌肠杆菌科家庭。运动试验与其他生化试验一起使用特殊的生化介质进行。
- 硫化物吲哚动力(SIM)培养基:用于测定的半固态琼脂硫化氢(H₂S)生产,吲哚的形成,而且的能动性。
- 吲哚脲酶(个人)测试:它是用来确定动力,吲哚形成,和脲酶的生产.
运动试验也用于革兰氏阳性球菌和肠球菌的物种分化。肠球菌都有效而且粪大肠都是非运动的,然而鸡肠杆菌和卡西黄曲霉/E。刺蛾一般都是活动的。
注意:在介质中加入最终浓度为0.005%的氯化四唑是有帮助的。四唑使琼脂的活力大大增强更容易阅读运动性。四氮唑在氧化状态下是无色的,但是少盐是红色的(细菌代谢的结果),并指出发生细菌生长的地方。
限制
- 黏液状的克雷伯氏菌菌株在管状介质中可能产生假阳性的运动反应;这是由于粘液菌株溢出之间的介质和管,给一个混浊的外观,这是经常与运动混淆。假阳性结果可以通过使用足够管深的培养基和仔细阅读,注意中央刺管的生长密度来避免。
- 大量的大肠casseliflavus而且大肠gallinarum据报道,使用一些管状运动介质是不运动的。
- 如果细菌鞭毛因加热、摇晃或其他创伤而受损,则可能发生假阴性反应。这样的环境冲击会使生物体静止不动。
- 有些微生物在35 ~ 37°时不会产生鞭毛蛋白,在22°C时才会产生。
- 三苯四唑对某些挑剔的细菌可能有抑制作用。
蒸馏水动力试验
这是一个简单而有用的判别方法弧菌物种(革兰氏阴性运动弯曲杆)和气单胞菌属物种(革兰氏阴性活动杆)。气单胞菌属物种会继续生长MacConkey琼脂有时在tcb产生黄色的菌落。它们都是氧化酶积极的。
过程
- 混出满满一圈的生长营养琼脂在载玻片一端的无菌蒸馏水中进行传代培养。在载玻片的另一端,在一滴蛋白胨水中混合另一圈生长物。
- 用盖杯盖住每一种制剂。
- 用40倍物镜进行显微镜检查。
结果
所有弧菌物种在蒸馏水中被固定,但在蛋白胨水中保持运动.气单胞菌属物种在蒸馏水和蛋白胨水中保持活动。
参考文献和进一步阅读
- 临床微生物程序手册,第四版。(2016)。在临床微生物程序手册,第四版.美国微生物学会。https://doi.org/10.1128/9781555818814