吲哚试验:原理，程序，结果

吲哚试验是用来确定一个生物体分裂氨基酸色氨酸形成化合物吲哚的能力。它被用作IMViC程序区分:区分家庭成员肠杆菌科．

原则

色氨酸被水解tryptophanase生产三种可能的最终产品;吲哚，丙酮酸和氨。吲哚生产用科瓦奇试剂或埃利希试剂检测。吲哚，如果存在，与试剂中的醛结合产生粉红色至紫红色醌类化合物(如果使用苯甲醛试剂)或者一个蓝色到绿色(如果使用肉桂醛试剂)．酶的缺失导致无颜色产生(即吲哚阴性)。

吲哚测试是一种常用生化试验有助于区分肠杆菌科和其他属。

质量控制

1. 如果颜色不是淡黄色，不要使用苯甲醛试剂(包括埃利希和科瓦' cs ')。
2. 每批试剂在使用前都要进行QC。每周QC内部准备的试剂，因为它们可能会变质，特别是如果不储存在4°C。如果反应变弱就丢弃。
3. 生物
   1. 大肠杆菌ATCC 25922 -吲哚阳性
   2. 铜绿假单胞菌ATCC 27853 -吲哚阴性
   3. 用于厌氧微生物的埃利希试剂
      1. Porphyromonas asaccharolyticaATCC 25260 -吲哚阳性
      2. 脆弱拟杆菌ATCC 25285 -吲哚阴性

过程

两种方法正在使用中;

1. 快速或现场吲哚测试其中吲哚是直接从生长在富含色氨酸的培养基上的菌落中检测出来的。
2. 一个常规管法需要一整夜的孵育，以识别弱吲哚生产生物体。

现场吲哚试验

现场吲哚测试采用以下三种方法之一。

• 用试剂浸透一张滤纸。使用木棍或细菌循环从琼脂表面去除一小部分细菌菌落，并在滤纸上擦拭样品。
• 将菌落扫到棉签上。向菌落拭子中加入一滴吲哚试剂。
• 直接将试剂添加到生长在琼脂表面的菌落中。

注意:细菌接种物不应取自含有染料的培养基，如MacConkey琼脂而且伊红美蓝琼脂因为在这种培养基上发酵的乳糖菌落的颜色会干扰测试解释。

常规管法

1. 用肉汤培养接种色氨酸肉汤或将被试生物的分离菌落乳化在色氨酸肉汤中。
2. 在37°C环境空气中孵育24-28小时。
3. 因为埃利希的方法
   a.向管子中加入0.5毫升二甲苯，倒转混合。我们解决。
   b.在试管侧面滴入6滴埃利希吲哚试剂，观察二甲苯层以下的颜色。
4. 对于科瓦克的方法，加入0.5毫升科瓦克试剂的肉汤培养管的一侧和观察半月板颜色变化．

结果

• 在20秒内出现棕红色到紫红色(苯甲醛试剂)或蓝色(肉桂醛试剂)表明存在吲哚。
• 阴性测试是无色或微黄色。

报告结果

1. 大肠杆菌吲哚和其他物质一样是阳性的吗肠杆菌科，弧菌，气单胞菌属，邻单胞菌属,巴斯德菌．大多数品种p .寻常的，m . morganii而且Providenica吲哚阳性。
2. 一些挑剔的革兰氏阴性棒是吲哚阳性，如Cardiobacteriumhominis而且巴斯德菌bettyae。
3. 丙酸菌属曼秀雷敦是吲哚阳性。

使用

1. 现场吲哚测试革兰氏染色剂结果和菌落特征可协助快速鉴定分离株。例如;一种平整、干燥的乳糖发酵菌落(粉红色)MacConkey琼脂这也是点吲哚阳性和氧化酶阴性可以推定为大肠杆菌。
2. 吲哚试验也有助于物种分化。
   1. 克雷伯氏菌物种:Klebs‪iella oxytoca吲哚是阳性的吗肺炎克雷伯菌是吲哚阴性。
   2. 枸橼酸杆菌属物种:枸橼酸杆菌属koseri吲哚阳性哪里为枸橼酸杆菌属freundii是吲哚阴性的
   3. 普罗透斯物种:变形杆菌属寻常的吲哚是阳性的吗变形杆菌是吲哚阴性的

你可以通过记住" OK VIP "这个短语来记住哪些物种是吲哚阳性．地点:O表示:Oxytica (克雷伯氏菌oxytoca)，K意味着(koseri-i.e。枸橼酸杆菌属koseri)，V庸俗的方式(变形杆菌属寻常的),知识产权表示吲哚阳性。

在诊断实验室，可以进行吲哚试验使用多重琼脂．最常用的三种琼脂培养基是:

1. Sulfide-indole-motility(SIM)培养基:SIM培养基是一种多重测试琼脂，用于同时测试吲哚的产生确定活性以及分离物产生硫化氢的能力。
2. 活性-吲哚脲酶(MIU)培养基:MIU培养基用于检测吲哚和尿素脲酶生物体的产生特征以及运动性测试。
3. 运动-吲哚-鸟氨酸(MIO)培养基:除了测试吲哚的产生，MIO琼脂用于活动性测验而且鸟氨酸脱羧酶．

限制

1. 生长培养基必须含有足量的色氨酸。不使用殖民地从Mueller-Hinton琼脂对于这个测试，因为色氨酸在酪蛋白的酸水解过程中被破坏。
2. 不要使用带有硝酸盐盘的平板，因为硝酸盐会通过诱导假阴性结果干扰现场吲哚测试。
3. 只能用肉桂醛试剂对厌氧微生物进行现场检测。它是更敏感的试剂，但不太稳定。
4. 如果快速吲哚试验为阴性，进行试管试验，因为分离物可能在更敏感的试管试验中呈阳性。
5. 对于挑剔的革兰氏阴性菌，比如c . hominis大量接种和提取是必要的。

参考文献和进一步阅读

1. 麦克威廉姆斯，m.p.(2009, 12月8日)。吲哚测试协议．https://www.asmscience.org/content/education/protocol/protocol.3202
2. 临床微生物程序手册，第四版。(2016)。在临床微生物程序手册，第四版．美国微生物学会。https://doi.org/10.1128/9781555818814