光颏敏感性试验:原理、程序、结果

链球菌引起的肺炎菌株对化学物质optochin(盐酸乙基氢铜碱)敏感。光chin敏感性允许推定鉴定α -溶血性链球菌为肺炎链球菌尽管一些肺炎球菌菌株对光下巴有耐药性。

有些肺炎球菌耐光下巴，有些耐胆汁，有些耐胆汁。没有一个测试是100%准确的，这两个测试的结合将防止错误报告。

其他α -溶血性链球菌是耐光下巴的。Optochin敏感性试验操作简单，价格低廉，灵敏度超过95%。

光下巴敏感度试验原理

盐酸乙基氢铜碱(optochin)是奎宁的衍生物。Optochin选择性抑制细胞的生长链球菌引起的肺炎浓度很低(5毫克/毫升或更低)。肺炎链球菌光颚盘周围应有带，但绿藻群链球菌在光颚盘周围无带。Optochin也可以抑制绿球菌，但只有在高得多的浓度。

Optochin是水溶性的，很容易扩散到琼脂培养基中。浸渍optochin的滤纸盘可用于盘扩散测试格式，以确定疑似肺炎球菌的易感性，从而确认其身份。S.pneumoniae由于表面张力的变化，圆盘周围的细胞被裂解，并产生一个抑制区。

所需的材料

1. 奥普托欣磁盘
   • 请向供应商购买光颌盘。每片用5 μg optochin浸渍。
   • 储存在2-8°C。避免光照、过热和潮湿。
   • 检查磁盘的有效期，并在到期前使用磁盘。
2. 5%羊血琼脂。
3. 标准微生物循环
4. Co2培养箱35-37°C。
5. 无菌钳。

质量控制

每批新的光颏盘都应进行阳性对照和阴性对照的测试。

1. 积极的:的增长肺炎链球菌菌株ATCC 49619被optochin抑制
2. 负面:的增长美国缓和的菌株ATCC 49456未被optochin抑制。

过程

Optochin (OP或P)磁盘(6 mm, 5µg)可以从商业供应商获得。如果没有商业来源的光chin圆盘，1:4000的盐酸乙氢铜碱溶液可以应用于无菌6毫米滤纸圆盘。

来自纯粹文化

1. 使用一个接种环,把两三个疑似纯文化的殖民地挑出来测试5%羊血琼脂板*。
2. 在板上有条纹的区域放置一个光下巴盘。
3. 将血琼脂板在35-37°C, 5% CO2(或在蜡烛罐中)孵育18 - 24小时。(文化在环境空气中不能很好地生长，并且出现较大的抑制区)．

注意:可以在同一平板上测试两种不同的分离株(通过在一半的血琼脂平板上划线)，但必须注意确保培养不重叠。

直接检测

用于直接检测肺炎链球菌在原代平板上，在血琼脂板第二象限加光下巴盘，观察周围抑制区肺炎链球菌．常规不建议添加光下巴盘，但对于有大量社区获得性肺炎患者标本的实验室可能有帮助。

结果

在光下巴盘附近的血琼脂板上观察生长情况，如适用，测量抑制区。

1. 使用6mm, 5µg的磁盘，14mm或更大的抑制区表明敏感性，并允许推定鉴定肺炎球菌。
2. 以毫米为单位测量抑制区，包括圆盘的直径。在完全抗视钦的隔离物的情况下，应记录磁盘的直径(6mm)。

Optochin测试预期结果:

1. 积极的:抑制区直径为14mm或更大，圆盘为6mm
2. 负面:无抑制区
3. 模棱两可的:任何小于14毫米的抑制区都是肺炎球菌的可疑区域;只有当它是肺炎球菌时，该菌株才被鉴定为肺炎球菌胆汁可溶性．

注意:较小的抑制区(< 14 mm)或没有抑制区表明需要进行胆汁溶解性测试。记住这一点很重要肺炎球菌有时对视下巴有耐药性。

参考文献和进一步阅读

1. 科尼曼的彩色地图集和诊断微生物学教科书(查看最新版本)
2. 临床微生物程序手册，第四版。(2016)。美国微生物学会。