粪便染色膜是检测肠道原生动物寄生虫和蠕虫卵的最有效的粪便检查方法。由于原生动物囊肿和一些蠕虫卵的折射率接近于水的折射率，因此需要染色程序来进行最佳检测和详细研究其内部结构。染色涂片有助于发现湿贴检查遗漏的小原生动物，并提供遇到原生动物的永久记录。
永久性污渍增强识别痢疾阿米巴以及检测贾第虫属这是两种比较常见和重要的原生动物。两种永久性污渍通常用于在粪便涂片中观察肠道原生动物:
- 苏木精铁染色和
- 改良的(惠特利)格莫里污点
原则
用于粪便标本的惠特利三色技术是对最初用于组织染色的戈马里技术的改进。这是一种简单而快速的技术，可以产生均匀的、染色良好的肠道原生动物、人体细胞、酵母和人工制品的涂片。
惠特利三色染色技术以发色剂2R和浅绿色SF为主要染色剂。三色染色在临床寄生虫学实验室中应用广泛。用新鲜的和聚乙烯醇(PVA)保存的粪便均可获得良好的效果。
试剂
| 试剂 | 量 |
| 铬变素2 r | 0.6克 |
| 浅绿色SF | 0.3克 |
| 磷钨酸 | 0.7克 |
| 醋酸(冰期) | 1.0毫升 |
| 蒸馏水 | 100毫升 |
- 向干燥组分中加入1.0 mL醋酸。
- 让混合物在室温下静置15-30分钟，然后加入100毫升蒸馏水。
- 污渍应该是紫色的。
- 在室温下妥善保存在玻璃或塑料瓶中，保质期为2年。
Iodine-Alcohol解决方案(70%乙醇加碘)
- 在70%的酒精中加入足够的碘晶体，制成深色浓汤。
- 在使用时，用70%的酒精将所需的量稀释到原液中，直到得到波特酒工作溶液。
- 确切的浓度不是临界的。
质量控制
建议使用a控制幻灯片一种已知的原生动物，如贾第虫属sp .来自PVA保存的标本，每次染色运行。正确的固定和染色会产生原生动物滋养体的蓝绿色细胞质略带紫色。核、包体(染色质体、红细胞、细菌)和夏柯-莱顿晶体呈红色，常带紫色。
如果没有更换可能已被水污染的酒精溶液而导致脱水不完全，则可能导致制剂浑浊。染色质量可以通过在从一种试剂转移到另一种试剂之间抽干载玻片来提高。
如果染色质量差，则涂片可能太厚或固定不良，或者由于使用的酒精-碘混合物太弱而没有去除残留的氯化汞。
过程
处理粪便标本时要戴手套。
涂片的准备
- 取一小部分新鲜粪便标本，用涂抹棒或刷子在显微镜载玻片上涂片
- 立即将涂片浸泡在Schaudinn固定液中，并允许固定至少30分钟。首选过夜固定。
- 如果标本是液体，将几滴粪便与三到四滴聚乙烯醇混合在玻片上，并在37°C的培养箱中干燥数小时。
- 如果样本是PVA，倒一些混合物在纸巾上吸收PVA。按照上面的描述，从纸巾中提取材料，准备幻灯片。
染色过程
- 涂片完全固定和干燥后，将玻片放入70%的酒精中3分钟。
- 将载玻片放入酒精-碘工作溶液中2-5分钟。
- 用70%的酒精洗两次，一次洗5分钟，一次洗2-5分钟。
- 置于三色染色溶液中10分钟。
- 放置在酸化的90%乙醇中5秒。
- 在100%乙醇中浸泡几次。
- 放入两次更换的100%乙醇中。
- 用二次二甲苯或甲苯去除酒精，每次2-5分钟。
- 添加安装介质和覆盖#1覆盖。
- 在油浸下检查寄生形式。
结果
完全固定并染色良好的囊肿和滋养体的细胞质为蓝绿色，带紫色。核染色质、类染色质体和摄入的红细胞呈红色至红紫色。背景材料呈现绿色，与原生动物形成了很好的颜色对比。
过程记录
- 如果标本固定不当，原生动物形态可能呈现脏红色。
- 不完全去除氯化汞(Schaudinn’s固定剂)可导致高屈光颗粒沉积，从而干扰寄生形态的检测。一定要定期更换70%乙醇-碘溶液，这样就不会发生这种情况。
- 涂片太绿可能表明70%乙醇对碘的去除不充分。延长在70%酒精中洗涤的时间和频繁更换溶液将最大限度地减少这一问题。
参考文献和进一步阅读
- 粪便标本检查。在诊断医学寄生虫学。华盛顿特区。美国微生物学会，2007年
- 粪便标本。染色程序．疾病控制和预防中心。