囊膜染色是一种用酸性染料和碱性染料分别对背景和细菌细胞进行染色的差示染色，使囊膜的存在一目了然。该胶囊在细胞质中合成，并在细胞外分泌，在细胞外包围细菌。
大多数被囊细菌有一个由多糖层组成的胶囊，但有些细菌有一个由多肽或糖蛋白组成的胶囊。胶囊与几种微生物的毒力有关，包括链球菌引起的肺炎而且奈瑟氏菌属meningitides，因为胶囊抗吞噬作用．
在胶囊染色过程中，“我们不加热固定和用水冲洗涂片”，因为热和水可能会将胶囊中的细菌清除。
胶囊染色原理
细菌胶囊是非离子的，所以酸性和碱性污渍都不会附着在它们的表面。因此，将它们形象化的最好方法是使用酸性染料染色背景(如黑罗辛、刚果红)和使用基本染色剂对细胞本身进行染色(如水晶紫、藏红花红、碱性品红和亚甲基蓝)。
细菌胶囊的演示有各种各样的方法。结果(细胞、背景和包膜的染色)取决于所使用的方法。这里讨论两种常用的方法:
A.印墨法
在这种方法中，使用了两种染料，水晶紫和印度墨水。在黑色背景下，胶囊在微生物周围形成了一个清晰的光晕。此方法用于演示隐球菌．
- 背景将是深色的(印度墨水的颜色)。
- 细菌细胞会被染成紫色(细菌细胞因带负电荷而吸收晶体紫碱性染料)。
- 胶囊(如果存在)将在黑暗背景下显示清晰(胶囊不带污渍)。
专家意见:Tasha Sturm，卡布里洛学院的微生物学家，“我用黑胶代替印度墨水，因为黑胶的背景更均匀，更容易传播”。详情请在评论区阅读。
安东尼的染色法
在这种类型的胶囊染色程序中原色为结晶紫，细胞的所有部分都染上了紫色的结晶紫。在胶囊染色过程中没有媒染剂。一个20%硫酸铜溶液具有脱色剂和反染色的双重作用。它通过洗去结晶紫来脱色胶囊，但不会脱色细胞。当硫酸铜脱色胶囊时，它也会中和胶囊。因此,被膜在紫色细胞周围呈现出一层模糊的蓝色光晕。
材料和试剂
- 测试细菌:被囊细菌培养36-48小时。肺炎克雷伯菌倾斜的在…的倾斜上生长的伊红美蓝琼脂或培养其他囊性细菌及非囊性细菌[注:在以牛奶为基础的培养基(如脱脂牛奶)中培养肺炎克雷伯菌会增加其胶囊的大小，使其更容易可视化。］
- 染色溶液:根据所使用的方法(结晶紫，印度墨水，黑松香，硫酸铜，碱性碳酸盐溶液，亚甲基蓝溶液等)。
- 显微镜幻灯片
- 接种环
- 100倍物镜光学显微镜(油浸)
- 浸油
- 煤气灶
- 纸
胶囊染色程序
A.印墨法
- 滴一滴印度墨水在一个干净的显微镜载玻片上，靠近磨砂边缘。
- 使用火焰环和无菌技术，去除一些肺炎克雷伯菌从培养管或培养皿中取出，混合到一滴印墨中。确保没有大的有机体团块，但尽量避免扩散。
- 将另一个干净的显微镜载玻片末端与含有生物体的载玻片末端成一定角度。把浆液摊开成一层薄膜。这是通过接触滴印墨与清洁的显微镜载玻片，并利用染料/载玻片的毛细管作用，使印墨散布在涂片上。
- 让薄膜自然风干(需要5-7分钟)。不要加热或吸干!热量会融化胶囊!
- 用水晶紫浸透载玻片1分钟，然后用清水轻轻冲洗。小心水可将胶囊从细胞中除去。
- 让幻灯片风干几分钟。不要弄脏幻灯片!吸墨胶会去除载玻片上的细菌和/或使胶囊变形。
- 观察油浸下的滑块。
结果:在黑暗的背景上寻找被清晰光晕包围的紫色细胞。光晕就是胶囊。你可能需要减少光的量，以使胶囊更容易看到。
安东尼的染色法
- 滴一滴结晶紫在一个干净的显微镜载玻片上，靠近磨砂边缘。
- 使用火焰循环和无菌技术，加入三个循环的测试细菌(任何被包裹的细菌，如肺炎克雷伯菌，肺炎链球菌)来自肉汤培养。如果你从培养皿中添加细菌，确保没有大块的有机体，但尽量避免滴散。
- 将另一个干净的显微镜载玻片末端与含有生物体的载玻片末端成一定角度。把浆液摊开成一层薄膜。这是通过用干净的显微镜载玻片接触结晶紫滴，并利用染料/载玻片的毛细管作用将结晶紫散布在涂片上完成的。
- 让薄膜自然风干(需要5-7分钟)。不要加热或吸干!热量会融化胶囊!
- 倾斜载玻片，用20%硫酸铜溶液冲洗。不要用水冲洗!水会将胶囊从细胞中除去。
- 让幻灯片风干几分钟。不要弄脏幻灯片!吸墨胶会去除载玻片上的细菌和/或使胶囊变形。
- 观察油浸下的滑块。
结果:在透明的背景上寻找被透明或淡蓝色光晕包围的紫色细胞。光晕就是胶囊。你可能需要减少光的量，以使胶囊更容易看到。
需要记住的要点
- 用镜片清洁剂清洁显微镜，清除镜片上的油污。
- 将染色废物和载玻片弃置在指定的废物容器内。
- 处理滑梯时要小心，因为微生物还没有被杀死。
参考资料及进一步阅读
