Hektoen Enteric (HE)琼脂于1968年由Sylvia King和William I. Metzger介绍。他们在芝加哥Hektoen研究所工作时配制了HE琼脂培养基,以提高回收率沙门氏菌而且志贺氏杆菌来自临床标本。它是一种选择性的和有差异的培养基。
他们在培养基中加入额外的碳水化合物和蛋白胨,以抵消胆盐的抑制作用。将两种染料加入到培养基中,溴百里酚蓝和酸性品红与其他染料相比,其毒性较低,从而提高了病原菌的回收率。HE琼脂目前被用作粪便标本的直接和间接镀膜介质,以提高从大量混合正常粪便菌群中沙门氏菌和志贺氏菌的回收率。
目录
目的
Hektoen肠内琼脂目前用作直接和间接镀膜介质,以恢复胃肠道病原体,如沙门氏菌而且志贺氏杆菌从怀疑含有这些微生物的食物、水和粪便样本中提取。
- 选择性培养基:它抑制大多数非致病性(正常菌群)肠道生物,并协助选择性恢复沙门氏菌而且志贺氏杆菌从粪便。
- 鉴别培养基:它使微生物学家能够注意菌落形态的视觉差异,并通过最少的额外测试迅速从致病革兰氏阴性杆中消除非致病性革兰氏阴性杆。
HE琼脂可用于粪便标本的初涂。它也可用于从富集肉汤(如革兰氏阴性肉汤或亚硒酸盐肉汤)接种怀疑含有少量沙门氏菌的粪便标本的隔夜生长传代培养。从琼脂平板直接接种菌落可以产生足够的微生物生长,否则在从腹泻粪便或肉汤培养的更稀的接种物中会被抑制。
原则
Hektoen肠道琼脂是一种从临床标本中分离和鉴别肠道病原体的选择性和鉴别培养基。
胆盐和染料的存在抑制大多数革兰氏阳性生物,只允许革兰氏阴性杆生长在HE琼脂上。高浓度的胆盐部分或完全抑制肠道内大多数非致病性大肠菌群。由于肠道病原体,沙门氏菌而且志贺氏杆菌能够耐受这些抑制物质,它们一般比大肠菌群生长得更快更大。
Hektoen肠道琼脂的组成
- 蛋白酶动物蛋白胨和酵母提取物:动物蛋白胨和酵母提取物提供营养基础。
- 氯化钠
- 胆汁盐:高胆盐浓度抑制所有革兰氏阳性细菌的生长,并阻碍许多大肠菌群菌株的生长。
- 硫代硫酸钠(硫源)和柠檬酸铁铵(用于检测H2S气体的产生)
由某些肠道革兰氏阴性菌产生H2S,如沙门氏菌,可在HE琼脂上检测到,因为配方中添加了硫代硫酸盐和柠檬酸铁铵。沙门氏菌产生细菌酶,使硫化物分子从介质中的硫代硫酸盐中释放出来。硫化物分子与氢离子结合形成H2S气体。H2S气体与柠檬酸铁铵反应,形成沉淀,形成黑色或有黑色中心的菌落。
其他非致病性肠道生物,如变形杆菌spp.而且枸橼酸杆菌属freundii,也产生H2S,但这些微生物通常被HE琼脂中的胆盐所抑制。如果这些生物能够克服胆盐的抑制作用并生长,它们通常可以与病原体区分开来,因为普罗透斯而且枸橼酸杆菌属freundii可以利用HE琼脂中存在的至少一种碳水化合物。中心为黑色的橙黄色菌落很可能不是肠道病原体,尽管罕见的菌株沙门氏菌能够进行乳糖发酵,并以这种方式出现。
- 碳水化合物:乳糖、蔗糖和水杨苷
碳水化合物(乳糖、蔗糖和水杨苷)的发酵是用来鉴别大肠菌群的区别特征之一。沙门氏菌而且志贺氏杆菌无法利用这三种特定的碳水化合物,而大多数非致病性大肠菌群至少可以利用其中一种。酸可以通过碳水化合物发酵产生,当pH值降低时,酸性品红与百里酚蓝反应产生黄色。
- 染料使用:溴百里酚蓝和酸性品红
- 非致病性大肠菌群(如果它们能够在胆盐存在下生长)将产生橘黄色菌落,这是由于至少一种碳水化合物产生酸。这种酸使溴百里酚蓝指示剂从中性绿色变为橙黄色。胆盐可从基质中析出,并在菌落周围呈模糊区。
- 如果乳糖和蔗糖阴性的生物利用水杨苷,将出现鲑鱼粉红色到橙黄色的菌落。
- 沙门氏菌和志贺氏菌不能利用乳糖、蔗糖或水杨酸产生酸,导致菌落呈半透明、淡绿色或蓝绿色,使它们能够迅速与非致病性生物区分开来。
由于HE琼脂主要是一种筛选琼脂,因此需要额外的测试来确认或排除这种可能性沙门氏菌或志贺氏杆菌.从商业鉴定试剂盒到试管生化(例如,TSI琼脂,尿素琼脂,赖氨酸脱羧酶)到体细胞抗原和荚膜抗原的血清学分型。
菌落特征
- 快速乳糖发酵剂(如大肠杆菌)适度抑制和产生亮橙色到鲑鱼粉色殖民地。
- 沙门氏菌菌落呈蓝绿色,典型的黑色中心来自硫化氢气体。
- 志贺氏杆菌看起来比沙门氏菌,随着颜色逐渐消退到蜂群的边缘。
- 普罗透斯菌株在某种程度上受到抑制;所发育的菌落是小而透明的,在外观上比种更有光泽或多水沙门氏菌或志贺氏杆菌.