某些细菌以H₂S的形式从含硫氨基酸或其他化合物中释放硫。这些细菌的这种能力可以作为它们鉴定的一个重要特征。
原则
能够产生H₂S的细菌种类通过酶促作用从半胱氨酸或硫代硫酸盐中释放硫化物。产生半胱氨酸脱硫酶的细菌能够从半胱氨酸中去除巯基和氨基，产生硫化氢、氨和丙酮酸。硫化氢也是由硫代硫酸盐还原酶在厌氧呼吸中还原硫代硫酸盐而产生的。
这样形成的无色H₂S气体与介质中存在的H₂S指示剂(铁、铋或铅)结合，产生不溶性的重金属硫化物，呈现为黑色沉淀物。
检测硫化氢的介质(H₂年代）
硫化氢生产的常用检测介质、硫的来源及硫化物指标如下:
| 媒体 | 硫源 | H₂年代指示器 |
| 亚硫酸铋 | 蛋白胨加亚硫酸盐 | 硫酸亚铁 |
| 柠檬酸硫化物琼脂 | 硫代硫酸钠 | 柠檬酸铁铵 |
| 柠檬酸脱氧胆酸琼脂 | 蛋白胨 | 枸橼酸铁 |
| 赖氨酸铁琼脂 | 硫代硫酸钠 | 柠檬酸铁铵 |
| 克利格勒铁琼脂(KIA) | 硫代硫酸钠 | 硫酸亚铁 |
| 三糖铁(TSI)琼脂 | 硫代硫酸钠 | 硫酸亚铁 |
| 醋酸铅琼脂 | 硫代硫酸钠 | 醋酸铅 |
| Salmonella-Shigella(SS)琼脂 | 硫代硫酸钠 | 枸橼酸铁 |
| 硫化物-吲哚-活性(SIM | 硫代硫酸钠 | 胨化铁 |
| 木糖赖氨酸脱氧胆酸(XLD)琼脂媒介 | 硫代硫酸钠 | 柠檬酸铁铵 |
| Hektoen肠道琼脂 | 硫代硫酸钠 | 柠檬酸铁铵 |
由于H₂S生产的检测介质类型不同，灵敏度也不同，微生物学家可以根据自己的需求和测试分离物的特点选择特定的检测系统。例如，在检测只产生微量H₂S的细菌时，应该使用最敏感的指示物醋酸铅。
注意:当与培养基混合时，醋酸铅可能会抑制许多挑剔细菌的生长，因此在测试时，应将浸渍过的醋酸铅滤纸盖在培养管盖下，而不是将其混合到培养基中。
在一种介质中检测到的H₂S可能在另一种介质中检测不到，因此在解释识别图表时，有必要了解所使用的测试系统。在诊断微生物学中，SIM、KIA或TSI管通常用于检测H₂S的产生。在这三种生化试验介质中，TSI最不敏感．据信，这种试验介质中的蔗糖抑制了硫化氢的产生。SIM比TSI和KIA更敏感。缺乏碳水化合物抑制H₂S的形成，并使用蛋白化铁作为指示剂，使SIM成为更好的检测H₂S产生的试验介质。
在所有H₂S检测系统中，终点是一种不溶性重金属硫化物，它在介质中或滤纸条上产生黑色沉淀。由于氢离子必须用于H₂S的形成，因此发黑首先出现在酸形成最大的测试介质中，即沿着接种线，在倾斜的琼脂介质的深处，或在琼脂表面生长的菌落中心。
过程
- 管媒体
- 将介质加热至室温并检查裂缝。如果出现裂缝，请勿使用。
- 使用无菌接种针，触摸一个隔离良好的菌落的中心。
- 从管子底部插到3 - 5毫米处。
- 拔针。
- 对于KIA或TSI，将琼脂的整个表面斜纹。
- 对于挑剔的生物可选:在管的顶部添加一条醋酸铅纸，并与管盖保持一致，使其延伸1英寸。进管子里。
- 地方帽松散在管。做不拧紧盖子，使管子里的气体释放出来。
- 在35 - 37°C有氧孵育18 - 24小时。
- 观察黑色沉淀表明硫化氢的产生。
- 如果需要，延长孵育时间仅用于检测H2S的产生。弯曲杆菌可能需要3天才能产生H2S。
- 板的媒体
- 条纹板，从而获得孤立的菌落。
- 在35 - 37°C进行有氧培养
- 观察发黑的菌落
结果及解释
- 积极的反应
- 管状介质中H2S的产生:整个介质呈黑色，枪托与斜面交界处有黑色环，枪托中有黑色沉淀。发黑通常开始于接种线。
- 平板介质中H2S的产生:黑色菌落，周围有棕黑色带或金属光泽
- 醋酸铅纸:纸条呈棕黑色
- 消极反应
- 管内介质产生H2S:管内无发黑现象
- 平板介质中H2S的产生:无发黑和无金属光泽菌落
- 醋酸铅纸:带材颜色不变
硫化氢阳性生物
- 枸橼酸杆菌属freundii
- 沙门氏菌物种
- 变形杆菌
- 变形杆菌属寻常的
- 迟缓
限制
- 对于利用蔗糖并抑制产生H2S的酶机制的生物，TSI上H2S的产生可能受到抑制。
- 醋酸铅对细菌有毒，可能抑制某些细菌的生长。
参考资料及进一步阅读
- 科尼曼彩色图谱和诊断微生物学教科书，第七版。
- 临床微生物程序手册，第四版。(2016)。美国微生物学会。
