o -硝基苯-β- d -半乳糖吡喃苷(ONPG)在结构上与乳糖相似(即ONPG是乳糖的类似物)，除了正硝基苯取代了葡萄糖。
在水解过程中，通过β-半乳糖苷酶的作用，ONPG裂解为半乳糖和邻硝基苯酚两个残基。ONPG是无色化合物:邻硝基苯酚是黄色的，提供了水解的视觉证据。
乳糖发酵细菌同时具有乳糖渗透酶和β-半乳糖苷酶，这两种酶是乳糖发酵试验中产生酸所必需的。渗透酶是乳糖分子渗透细菌细胞所必需的，在细菌细胞中β-半乳糖苷酶可以裂解半乳糖苷键，产生葡萄糖和半乳糖。
非乳糖发酵细菌缺乏这两种酶，不能从乳糖产生酸。
一些细菌种类似乎是非乳糖发酵剂，因为它们缺乏渗透酶，但有β-半乳糖苷酶，ONPG检测阳性．由于渗透酶活性缓慢，所谓的乳糖发酵剂可能会延迟从乳糖中生产酸。在这些情况下，一个积极的ONPG测试可以提供快速识别延迟乳糖发酵。
目录
ONPG测试结果与乳糖发酵:
- 乳糖发酵剂(ONPG阳性)：大肠杆菌,克雷伯氏菌肠杆菌属产生β-半乳糖苷酶和渗透酶
- 晚期乳糖发酵剂(ONPG阳性)：柠檬酸杆菌属，亚利桑那州属只产生β-半乳糖苷酶所以它们慢慢发酵乳糖。
- 非乳糖发酵剂(ONPG阴性):沙门氏菌spp;志贺氏杆菌spp;普罗透斯spp;Providenciaspp和摩根氏菌属仕达屋优先计划不产生β-半乳糖苷酶所以不能发酵乳糖。
介质和试剂
- 磷酸钠缓冲液，1m, pH 7.0
- o -硝基苯-β- d -半乳糖皮甙(ONPG)， 0.75 M
- 生理盐水
- Toulene
质量控制
- 积极的控制:大肠杆菌
- 消极的控制:变形杆菌属寻常的
过程
在含有乳糖的培养基中生长的细菌(以诱导半乳糖苷酶的产生)，如克利格勒铁琼脂(KIA)或三糖铁(TSI)琼脂，在ONPG测试中产生最佳结果。
注意:β-半乳糖苷酶(诱导酶)仅在乳糖底物存在时制备
- 在0.05mL生理盐水中乳化一个充满细菌生长的环，以产生沉重的悬浮液
- 在悬浮液中加入一滴甲苯，并剧烈混合几秒钟，以释放细菌细胞的酶。
- 等量的缓冲ONPG溶液被添加到悬液中。
- 混合物放置在37oC水浴
使用ONPG平板电脑时
- 通过向试管中的片剂中加入1mL蒸馏水，将一环细菌悬液直接添加到ONPG底物中。
- 这个悬挂也放置在一个37oC水浴
结果及解释
对某些生物来说，ONPG水解成邻硝基苯酚的速度可能很快;在5到10分钟内产生可见的黄色反应。
大多数检测在1小时内呈阳性;然而，在孵育24小时前不应将反应解释为阴性。
黄色通常是明显的，表明生物通过β-半乳糖苷酶的作用从ONPG底物中产生了邻硝基苯酚
