免疫层析/横向流动免疫分析:原理和应用

免疫层析，也称为横向流动免疫分析，是层析和免疫分析的结合。该技术用于临床、兽医和工业应用的广泛测试。

也取决于化验方法抗原(用于检测抗体)或抗体(用于检测抗原)被固定在一个硝基纤维膜上，在一个药筒装置的离散点。在抗体或抗原捕获和流动洗涤步骤之后，依次添加酶标记的偶联物和底物，直接在膜上出现有颜色的反应产物。

典型的免疫层析检测条由

1. 一个吸水垫在哪个试样上应用，
2. 一个偶联或试剂垫含有针对目标分析物的特异性抗体，并与有色颗粒(即胶体金颗粒或乳胶微球)结合，
3. 一种反应膜，其上的反目标分析物抗体被固定在一条贯穿膜的线上捕获区或测试线，
4. 一个控制区域含有偶联抗体的特异性抗体，以及
5. 由另一个废物组成的废物贮存器吸湿垫(灯芯组件)设计用于通过毛细管作用将样品拉过反应膜。

条带的组件固定在惰性背衬材料上，可以格式化为一个简单的试纸尺或在一个带样品端口和反应窗口的塑料套管内捕获(测试)而且控制区域．

快速诊断测试或快速诊断检测横向流动免疫层析抗原测试依赖于捕获染料标记的抗体，在硝化纤维条上产生可见的条带，通常包裹在塑料外壳中，称为卡带。快速诊断检测也可用于检测抗体。

免疫层析或横向流动免疫分析的许多变体已经开发成商业产品，但它们都根据相同的基本原理工作。

检测抗原的原理

临床微生物实验室中使用的横向流动免疫分析通常是双抗体夹心分析。用于抗原的检测捕获区（测试线)在膜上含有固定化抗体．

将含有待检测抗原的标本(如血清、尿液)放置在样品垫上，样品垫吸收标本液。然后液体迁移到偶联垫，其中包含针对抗原的偶联抗体(与金色，彩色乳胶或发色团偶联)。在这里，形成了抗原-抗体共轭复合物。Ag-Ab复合物继续在膜上迁移，直到它到达捕获区，在那里复合物将与固定化抗体结合。随着越来越多的Ag-Ab复合物在“测试”线上被捕获，这条线在膜上变得可见。

然后，样品沿着条带进一步迁移，直到到达控制区域过量的共轭结合产生a第二条可见线(控制线)在膜上。这条控制线表明样品已按预期的方式在膜上迁移。

非抗原特异性抗体或不与抗原复合的偶联抗体不会在测试线中捕获，并继续迁移到控制线．控制线由针对免疫球蛋白的固定抗体组成。随着越来越多的未复合抗体越过“控制线”，未复合抗体被捕获并在“控制线”上可见。出现“控制”行仅表示测试正确执行。

测试结果的解释

1. 积极的结果:膜上控制区和测试区有一条清晰的线。
2. 消极的结果:控制区的单线。
3. 无效:在测试区域内没有相应的控制线的单线

应用程序

免疫层析方法广泛应用于临床;

1. 毒素检测
2. 妊娠试验。人绒毛膜促性腺激素(hCG)的检测
3. 寄生虫感染的诊断
   1. 疟疾:疟疾-检测特定抗原(乳酸脱氢酶，醛缩酶，和恶性疟原虫由受感染个体血液中的疟原虫产生的富含组氨酸的蛋白质。
   2. g . lamblia而且隐孢子虫以及(ImmunoCardSTAT !隐孢子虫和贾第虫属）
   3. G.lamblia,大肠阿米巴/ E。dispar,c以及有关粪便样本(微小寄生虫分类小组)
4. 细菌感染的诊断
   1. 肺炎支原体(免疫卡支原体，检测肺炎支原体具体的IgM在血清样本中)
   2. 已经证实粪便抗原(ImmunoCardSTAT SpSA)
   3. 霍乱弧菌O1和O139来自粪便标本
   4. 链球菌pneumoniae脑脊液或尿液中的抗原检测(Binax NOW链球菌引起的肺炎抗原卡)
5. 病毒感染的诊断
   • 抗原检测
     1. RSV (Binax NOW RSV, Remel expect RSV)
     2. 轮状病毒(ImmunoCardSTAT !轮状病毒)
     3. 甲型/乙型流感(BinaxNOW甲型和乙型流感)
     4. 乙型肝炎和丙型肝炎感染
   • 抗体检测
     • HIV-1和HIV-2抗体检测(OraQuick Advance快速HIV-1/2抗体检测，Reveal G4快速HIV-1抗体检测，Multispot HIV-1/HIV-2快速检测等)

优势

• 可商用且成本低(与EIA、免疫荧光或RIA）
• 灵敏度和特异性与其他成熟方法相当或更好
• 快速测试
• 样品体积小的要求
• 操作简单(大多数情况下不需要样品预处理)
• 简单和用户友好(执行和解释测试结果)
• 可用于野外或农村环境:在广泛的环境条件下的稳定性和非常长的保质期。

限制

• 大多是定性的或半定量的
• 大多数设备可以同时检测一种或两种以上的分析物

参考资料及进一步阅读

• Cherian Sebastian等人。免疫层析法:格式和应用。《印度美洲药物研究杂志》，2016:6(07)。
• 科尼曼的彩色图集和诊断微生物学教科书